24种中草药水提物抗五步蛇毒活性研究与从石柑子水提物中分离纯化和鉴定抗五步蛇毒活性的有效成分研究

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1、脅主Ｗ爹迖士莩顼士学位论文２４种中草药水提物抗五步蛇寿潘牲耐堯与从石柑子水提物中分离此化和蟇走抗五步蛇秦活牲的有故成分研念陈典成指导教师：余晓东教授专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：动物毒素二〇一八年三月重庆师范大学硕士学位论文24种中草药水提物抗五步蛇毒活性研究与从石柑子水提物中分离纯化和鉴定抗五步蛇毒活性的有效成分研究硕士研究生:陈典成指导教师:余晓东教授和七一副教授学科专业:生物化学与分子生物学所在学院:生命科学学院重庆师范大学2018年3月AThesisSubmitte

2、dtoChongqingNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterStudyontheAnti-AgkistrodonacutusVenomActivitiesofAqueousExtractsof24SpeciesofChineseHerbalMedicinesandonIsolationandIdentificationoftheEffectiveAnti-snakeVenomComponentsfromAqueou

3、sExtractsofPothoschinensisCandidate:DianchengChenSupervisor:ProfessorXiaodongYuViceProfessorQiyiHeMajor:BiochemistryandMolecularBiologyCollege:CollegeofLifeSciencesChongqingNormalUniversityMarch，2018重庆师范大学硕士学位论文中文摘要24种中草药水提物抗五步蛇毒活性研究与从石柑子水提物中分离纯化和鉴定抗五步蛇毒活性的有效成分研究摘

4、要毒蛇咬伤（俗称蛇伤）被WHO规定为一种被忽视的热带疾病，其多发于热带或亚热带的贫困山村。蛇伤中毒常常给蛇伤患者带来身体损害、经济负担和心理恐慌后遗症等。蛇伤急救常用的治疗方法是采用从被蛇毒免疫的动物（如马）制备的抗蛇毒血清来治疗蛇伤病人。但是，在部分地区（主要是不发达或发展中地区）因多种因素限制仍然采用草药治疗蛇伤。尤其在我国，采用中草药治疗蛇伤获得了比较满意的效果，为蛇伤病人解除了疾苦。可是，采用中草药治疗蛇伤的科学实验证据还不充分，为此，本研究采用我国蛇伤医生常用来治疗蛇伤病人的24味中草药。通过抗蛇毒活性实验来初步

5、揭示这些中草药的有效性。使用超声波提取方式，分别从24味中草药中获得各自的水提物，再用琼脂糖平板法分别检测这24种中草药水提物对五步蛇毒中主要功能成分包括PLA2、透明质酸酶和蛋白水解酶等的活性的抑制作用，实验结果表明，这24味中草药都有抗蛇毒活性作用，有的强，有的弱，唯有石柑子抗五步蛇毒活性的作用最强。为了进一步确认石柑子水提物的抗蛇毒活性作用，体外实验结果表明，石柑子水提物对五步蛇毒中的磷脂酶A2（PLA2）活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、凝血活性均能完全抑制，且呈量效关系；活体动物（小白鼠）实验结果表明，石柑子

6、水提物对五步蛇毒的出血活性和致死活性均具有显著抑制作用。为了鉴定出石柑子水提物中抗蛇毒活性的有效成分，我们采用大孔树脂层析，分别用25%、50%和75%乙醇洗脱，收集洗脱液，检测其抗蛇毒PLA2和蛋白水解酶的活性作用，实验结果表明，采用75%乙醇洗脱出的洗脱液的抗蛇毒活性效果最强；再将该洗脱液进行HPLC分离纯化，获得三个分离峰即P1、P2和P3，分别开展这三个峰抗蛇毒PLA2和蛋白水解酶的活性作用检测，实验结果表明，P2峰具有最好的抗蛇毒活性作用。进一步鉴定P2峰中的有效物质，我们使用气质联用仪检测分析，初步实验结果表明

7、，P2峰的主要有效成分为邻苯三酚，其呈现抗五步蛇毒PLA2和蛋白水解酶的活性作用非常明显。总之，本研究初步揭示了24味中草药具有一定的抗五步蛇毒活性，其中，石柑子抗五步蛇毒活性最强，并从石柑子中分离鉴定出有效成分之一为邻苯三酚，I重庆师范大学硕士学位论文中文摘要这些初步实验结果在某种程度上提供了我国蛇伤医生常用的24味中草药治疗蛇伤的科学实验证据，但是，还有很多有效成分需要进一步的鉴定研究，以及这些有效成分如何在分子水平与蛇毒中主要毒素成分之间发生相互作用也需要进一步研究。关键词：中草药、石柑子、五步蛇毒、PLA2、蛋白水

8、解酶II重庆师范大学硕士学位论文英文摘要StudyontheAnti-AgkistrodonacutusVenomActivitiesofAqueousExtractsof24SpeciesofChineseHerbalMedicinesandonIsolationandIdentificationof