t-spot诊断结核感染ppt课件

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1、T-SPOT.TB诊断结核感染临床应用进展1主要内容结核病及其诊断现状T-SPOT.TB的原理及其特点T-SPOT.TB技术的应用2主要内容结核病及其诊断现状T-SPOT.TB的原理及其特点T-SPOT.TB技术的应用3结核的现状结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据WHO统计，全球约有20亿人感染结核分枝杆菌，每年有约200万人死于结核。我国是世界上22个结核病高负担国家之一，结核感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的2倍以上。4中国是结核感染高负担国家患者人数占全球的14.3%，具体表现为

2、“五多”感染人数多—5.5亿人感染过结核患病人数多—现有活动性肺结核患者500万潜伏感染人数多—受限于检测条件较难统计，2009年流行病调查结果为总人口的44.5%（因采用PPD检测，假阳性较多）新发患者多—仅活动性肺结核2009年新发病患107万死亡人数多—13万/年5结核的传统诊断手段结核菌素皮试：低敏感性：免疫力低下人群中其敏感性大大降低。低特异性：与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉，易造成“假阳性”结果。免疫学诊断─抗原、抗体（胶体金）细菌学检查：常规培养：2月；快速培养：1周；涂片阳性率取决

3、于采集标本中细菌数量，不利于早期诊断。病理学检查：阳性率低，对取材有较高要求，有创伤，对肉芽肿性病变需进一步鉴别。分子生物学诊断─PCR影像学检查6免疫学诊断PPD皮肤试验抗体检测假阳性率高48-72h读取结果敏感性、特异性差7WHO关于血清学检测声明2011年7月20日，世界卫生组织（WHO）正式声明，要求禁止将血清学检测方法（抗原，抗体，蛋白芯片等）用于肺结核和肺外结核的诊断。WHOwarnsagainsttheuseofinaccuratecommercialserologicaltestsfor

4、pulmonaryandextra-pulmonaryTB.AsubstandardtestwithunreliableresultsTBcanbewronglydiagnosedAserologicaltestfordiagnosingactiveTBdiseaseisbadpracticeProblemsofmisdiagnosisTheinaccurateserologicaltestsarecostlySellingsubstandardtestswithunreliableresults8细菌

5、学诊断抗酸染色涂片分枝杆菌培养阳性率低含菌量≥1万/mL痰液需时4-6周9快速培养系统1.BDBACTECMGIT960培养系统2.BacTALERT3D培养系统10分子生物学诊断•实时荧光定量PCR技术：HRM•线性探针耐多药检测技术：HAIN技术•基因芯片•PCR–电离质谱检测技术11病理学检查阳性率低对取材有较高要求，有创伤对肉芽肿性病变需进一步鉴别12影像学检查目前诊断活动性肺结核的重要手段，尤其是粟粒性肺结核对潜伏性结核诊断价值不大对肺外结核诊断价值不大13现有检测手段不能满足临床要求假阴性：

6、免疫力低下或HIV人群，新生儿、老弱人群，药物影响；假阳性：BCG接种人群，其它分支杆菌感染，交叉污染肺外的结核感染无法明确诊断抗痨治疗疗效无法评价无法排筛结核感染，造成生物制剂或移植手术治疗后病患免疫力下降，引发结核，形成医疗事故14主要内容结核病及其诊断现状T-SPOT.TB的原理及其特点T-SPOT.TB技术的应用1521世纪结核检测的重大突破γ-干扰素释放实验（IGRAs)被商化（2006年），用于结核感染的检测将结核菌特异性抗原加入含受试者的血液标本的培养基中进行孵化，如果受试者受到过MTB感

7、染，那么被结核菌激活的记忆T细胞就会对这些特异性抗原产生反应，发生增殖分化并释放γ-干扰素通过定量检测γ-干扰素的释放水平，来诊断MTB感染T-SPOT.TB(结核感染T细胞斑点试验)16γ干扰素检测阴性γ干扰素检测阳性TB抗原多肽T细胞活化T细胞γ干扰素17基于T淋巴细胞检测结核感染的原理结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T细胞当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放r干扰素r干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子18基于T淋巴细胞检测结

8、核感染的原理T-SPOT.TB技术：利用结核杆菌感染者外周血单核细胞（PBMC）中存在结核特异性T细胞，这些淋巴细胞在受到结核特异抗原刺激后分泌r干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。检测外周血中受结核特异抗原刺激释放r干扰素的T淋巴细胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表一个细胞，计算出抗原特异性细胞的频率。19基于T淋巴细胞检测结核感染的原理包20基于T淋巴细胞检测结核感染的原理患者体内存在针对MTB的