影响_ms培养基凝固效果的几个因素的研究

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1、影响MS培养基凝固效果的几个因素的研究在植物组织培养过程中，一般用琼脂作固化剂使培养胶化，其凝固效果直接关系培养材料的生长或生存。目前已有不少关于培养基高温高压灭菌后pH值变化的研究；但对于影响培养基凝固效果的具体因素研究极少。笔者以MS培养基为对象，探讨影响其凝固效果的多方面因素，以利于组培材料的生长。1材料与方法1.1材料与药品MS培养基；琼脂条(海洋食品有限公司制)；琼脂粉(日本进口，上海化学试剂)；碳源：蔗糖、果糖、食用白糖、葡萄糖；活性炭。1.2方法将母液兑成完全MS培养基，用稀HC1或稀NaOH调节培养基的pH值至所

2、需水平，在每个容量为50ml的三角瓶中统一装入30ml培养基。在不进行其相关因素实验时，培养基中都是添加了3％蔗糖和0.8％的琼脂粉，分装前pH值调至5.8，118～120℃灭菌20min。pH计型号pHS-3c型酸度计，采用全量程复合玻璃电极，可精确设置被测溶液的温度，实现温度补偿，读数准确，方便快捷。3次重复，灭菌后培养基置于25℃室内1h后观察，采取多次观察分析，用平均值进行结果统计。2结果与分析2.1琼脂浓度和培养基pH值对培养基凝固效果的影响2.1.1琼脂的浓度对MS培养基凝固效果的影响。表1显示，琼脂作为固化剂对培养

3、基的凝固有直接影响，浓度的高低直接关系到培养基的凝固效果，培养基的凝固效果与琼脂用量呈正相关。一般情况下，琼脂浓度低于0.6％，培养基就不能很好地凝固，当浓度达0.8％一般就能满足实验要求。琼脂在培养基中仅作为固化剂，但其中含有多种杂质成分，可能对培养基成分会有一定的影响，在用量上应加以考虑。日本进口的琼脂粉比琼脂条的凝固效果稍好，主要是因为琼脂条的杂质多，琼脂粉的有效成分相对高一些。这与陈永勤的研究结果相反。表1琼脂浓度和培养基pH值对培养基凝固效果的影响琼脂浓度g/L培养基pH4.004.505.005.506.006.50

4、7.007.508.008.509.005A(a)A(a)A(a)B(a)B(b)C(b)C(b)C(c)C(c)C(c)C(c)6A(a)A(a)A(a)B(b)B(b)C(c)D(c)D(d)D(d)D(d)D(d)7A(a)A(a)B(a)B(b)C(c)D(d)D(d)D(d)E(d)E(e)E(e)8A(a)A(a)B(b)C(c)D(d)D(d)E(d)E(d)F(f)F(f)F(f)9A(a)B(a)C(c)C(c)E(d)F(e)F(e)F(f)F(f)F(f)F(f)10A(a)B(b)C(b)C(c)E(d)

5、F(e)F(f)F(f)F(f)F(f)F(f)11B(a)B(b)C(c)D(c)E(e)F(f)F(f)F(f)F(f)F(f)F(f)注：大、小写字母分别表示进口琼脂粉和国产琼脂条。A或(a)，凝固很差、完全液体状态；B或(b)，凝固差、稀糊状；C或(c)，凝固一般、轻晃动时会滑动；D或(d)，凝固较好、不太滑动；E或(e)，凝固好、不滑动；F或(f)，凝固很好、很硬、培养基上有一层水。下表同。2.1.2pH值对MS培养基凝固效果的影响。MS培养基的凝固与pH值呈正相关。当pH值低于5.50时，培养基一般不能很好地凝固，随

6、pH值的提高，培养基的凝固效果明显改善。植物组织在一定pH值下才能正常生长，因此在配制时考虑培养基凝固情况的同时，也要注意pH值的大小。2.1.3琼脂的用量与培养基pH值的互补作用。试验表明，当琼脂浓度过小时，可通过提高培养基的pH值来改善凝固效果；当pH值低时也可以通过增加琼脂的浓度来改善凝固效果，这与陈永勤的研究相一致。2.2碳源对MS培养基凝固效果的影响在培养基中一般要加入一定量的碳源，碳源有降低培养基灭菌后凝固效果的效应。表2显示，碳源添加后，灭菌后培养基的凝固效果明显降低，降低程度与所添加的碳源量呈正相关；不同碳源培养

7、基的下降程度有差异：添加3％蔗糖、2％食用白糖、1％葡萄糖或1％果糖时就能明显降低培养基灭菌后的凝固效果。相同条件下，果糖与葡萄糖的影响较大，能显著降低培养基的凝固效果，下降程度是果糖>葡萄糖>食用白糖>蔗糖。添加一定量的碳源促进了培养基灭菌过程中pH值的下降。Ball认为在高温灭菌时，培养基中蔗糖会水解成果糖和葡萄糖，而葡萄糖进一步变成葡萄糖酸，从而导致培养基pH值的下降。碳源在灭菌过程中水解，形成酸性物质，使培养基pH值下降，从而凝固效果降低。添加果糖、葡萄糖影响明显，由于高温灭菌后，果糖培养基的pH值比葡萄糖的下降幅度大得

8、多，更易形成酸性物质。表2碳源对MS培养基凝固效果的影响碳源种类碳源浓度%012345蔗糖E+EE-D+C+C食用白糖E+E-D+DCC-葡萄糖E+DDC+CC-果糖E+D-CCBB注：“+”表示凝固效果略高于标记水平；“一”表示凝固效果略低于标记水平。表4同。