抗原的提取与制备

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1、绪言第一节免疫学技术的范畴与应用一、免疫学技术的范畴二、免疫学技术的应用特点免疫学技术的范畴1、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定2、对具有免疫活性物质的定性、定量测定（范围较广）免疫学技术的应用特点1、对象——“包罗万象”2、方法——“兼容并蓄”（牵涉到物理，化学，生物，医学，计算机等各学科）*如何学习和使用免疫学技术？基本原理的理解+说明书和手册（向仪器或试剂盒供应商索取或网上下载）第二节有关免疫学基本概念一、抗原的概念与属性二、免疫细胞的概念与分类三、免疫应答的概念与过程1、与抗体结合的物质2、能够被免疫系统识别的物质3、能够激活免疫细胞并与免疫效应物起反应的物质抗原免疫原性—

2、—可识别、可反应性（诱导机体产生免疫应答的特性）免疫反应性——选择结合性（和免疫应答产物特异性结合的特性）抗原的概念与属性*抗原和半抗原免疫细胞的概念与分类免疫细胞（Immunecells）泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关的细胞。免疫活性细胞（Immunecompetentcell，ICC）能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、分化并形成效应产物的淋巴细胞。免疫细胞的类型红细胞血小板肥大细胞中性粒细胞巨噬细胞树突状细胞浆细胞T细胞NK细胞免疫应答的概念与过程免疫应答（immuneresponse）免疫系统接触抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并使特异性淋巴细胞活化、增殖；表现出

3、免疫效应的过程。免疫应答的阶段1、抗原识别阶段（antigen-recognizingphase）2、淋巴细胞活化阶段（lymphocyte-activatingphase）3、抗原清除阶段（antigen-eliminatingphase）第三节抗原抗体反应的基本原理一、抗原抗体反应的原理二、抗原抗体反应的特点三、影响抗原抗体反应的因素抗原抗体反应的原理1、抗原抗体之间的作用力2、抗原抗体结合物析出原因参与抗原抗体相互作用的力1、电荷引力（库仑引力）2、分子力（VanderWaals力，分子随机产生的电偶极矩极化而引起的相互作用）3、氢键结合力（氢和电负性大的原子结合,带正电的原子核暴

4、露于外,可吸引其它电负性大的原子）4、疏水作用力（由大分子中疏水基团相互接近.而形成的一种作用力）*以上作用力均非共价键单独的抗原或抗体不自行聚合析出的原因亲水胶体的形成1、电荷排斥力（由蛋白质的等电点决定）2、水化层的形成抗原抗体的析出抗原抗体的结合：可以导致电荷的中和水化层破坏蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体，聚合析出需要电解质的辅助抗原抗体反应的特点1、特异性2、可逆性3、适合比例性特异性及其相对性抗原A抗原C抗原B特异性反应交叉反应无反应抗体可逆性K（亲和常数）=Ag+AbAgAb适合比例性抗体含量抗原含量前带后带等价带网格学说（latticetheory）抗体过剩抗原过剩抗体抗体

5、比例合适抗原抗体反应的影响因素1、电解质2、酸碱度（pH值6-8）3、温度（37-42。C）第四节免疫学检测技术的评价一、评价标准二、特异性与敏感性的关系评价标准Specificity（特异）：检测信号针对性和排它性Sensitivity（灵敏）：可测出的最低含量Simplicity（简便）：操作是否方便Safety（安全）：是否有污染，对操作者的伤害Saving（节约）：性能/价格比特异性与敏感性的关系灵敏度高、特异性低（假阳性）特异性高、灵敏度低（假阴性）抗原的提取与制备第一节抗原/免疫原制备的基本概念一、抗原制备的目的二、抗原的“纯度”三、抗原制备的主要技术途径抗原制备的目的免疫原

6、：激活T、B细胞半抗原：检测相应抗体抗原的“纯度”免疫原：除保留可被B细胞识别的抗原决定簇，还需保留足够的被T细胞识别的抗原决定簇半抗原：尽可能减少影响反应特异性的抗原决定簇抗原制备的主要技术途径天然抗原——分离、纯化半抗原——人工合成、载体联接抗原肽——合成、基因工程制备第二节完全抗原/免疫原的制备方法一、颗粒性抗原的制备二、可溶性抗原的制备颗粒性抗原的制备1、抗原的获取：采集→分离2、无害化处理：去除对机体有毒成分，如用甲醛（细胞，细菌）可溶性抗原的制备与纯化1、处理与粉碎2、蛋白质分离富集3、单一组分提取4、抗原纯度鉴定（蛋白质、糖蛋白、脂蛋白）处理与粉碎组织粉碎：机械高速捣碎机，

7、研磨生物酶消化（蛋白酶、胶原酶）细胞破碎：物理反复冻融，冷热交替，超声化学表面活性剂生物溶酶，自溶蛋白质分离选择性沉淀：盐析，有机溶剂沉淀，水溶性非离子型聚合物沉淀（聚乙二醇）透析技术：半透膜超滤技术：负压+滤膜单一组分提取的方法层析技术：凝胶过滤离子交换亲和层析凝胶层析（分子筛）离子交换层析+++———————++++++++——+++——++亲和层析单一组分提取的方法（续）离心技术：差速离心密度梯度离心电泳技术：电泳洗脱等电聚焦