gb-t13883-1992 饲料中硒的测定方法2,3--二氨基萘荧光法

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1、中华人民共和国国家标准饲料中硒的测定方法2,3一二氨基蔡荧光法GB/T13883一92Methodforthedeterminationofseleniuminfeedstuffs-(DAN)fluorometrt主肠内容与适用范围本标准规定了用2,3一二氨基蔡(DAN)荧光法测定饲料中硒的方法。本标准适用于配合饲料、预混合料、浓缩饲料和单一饲料中硒的测定。在萃取液中检测范围为。.001^-0.1pg/mL(以Se计)。2引用标准GB1.4标准化工作导则化学分析方法标准编写规定GB6682实验室

2、用水规格3方法原理先将试样中有机物破坏，使硒游离出来，在微酸性溶液中硒(Iv)和2,3一二氨基蔡(DAN)生成4,5-苯基苯并硒二哇，用环己烷直接在生成络合物的同一酸度溶液中萃取，用荧光光度计测定其荧光强度。4试剂实验室用水应符合GB6682中二级用水的规格，使用试剂除特殊规定外，应为分析纯。4.1高氯酸优级纯(pl.67g/mL)e4.2硝酸优级纯(pl.42g/mL)e4.3环己烷p0.778-0.80g/mL.4.4盐酸优级纯(1+3),4.5盐酸c(Hc==0.1mol/I。4.6氨水p

3、0.90g/mL.4.7盐酸径胺一乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液称取10gEDTA溶于500mL水中，加入25g盐酸轻胺使其溶解，用水稀至1000mL,4.82,3一二氨基蔡(DAN)溶液称取DANO.1g于150mL烧杯中，加入100mLO.1mol/L盐酸使其溶解，转移到250mL分液漏斗，加入20ml,环己烷(4.3)振荡1min，待分层后弃去环己烷，水相重复用环己烷处理2-3次。水相放入棕色瓶中上面加盖3mm厚的环己烷，于暗处保存，此液可使用数周。4.9硒标准贮备溶液称取硒粉(纯度99

4、%以上)25m郊精确至0.01mg)，入100mL烧杯中，加入10mL硝酸加热溶解，冷至室温，用水转移至1000mL容量瓶中并稀至刻度，摇匀，此液1mL含25.00pg的硒。国家技术监督局1992一11-24批准1993-06一01实施GB/T13883一924.10硒标准工作溶液吸取(4.9)溶液1.00ml、入50mL高型烧杯中按分析步骤消化至高氯酸冒烟5min，取下稍冷，加1mL水和1mL盐酸(4.4)摇匀，放置10min用盐酸(4.5)转移至250mL容量瓶中并稀至刻度摇匀，此液1.00

5、MI含硒0.1pg.4.11甲酚红0.4g/L水溶液，称取。.1g甲酚红入400mL烧杯中，加少许水加氨水(4.6)使其溶解用水稀至250mL,摇匀。5仪器、设备5.1荧光光度计激发波长365^385nm,荧光发射波长520^-525nm,lcm石英比色杯。5.2实验室用样品粉碎机标准分析筛孔径(0.42,0.25mm).5.3分析天平分度值。.0001g,5.4可调温电炉(600W)或电热板(3000W)o5.5高型烧杯50mL和相应大小的表面皿。5.6具塞比色管50mL,5.7刻度吸量管2m

6、l,,10mL,6试样的制备取已粉碎至0.42mm的试样40^50g人250mL烧杯中加水至能搅动的糊状，在搅拌器上搅10-15min，倒在小搪瓷盘中铺平，放入烘箱700C烘干，粉碎机上磨至。.25mm,混匀装入密封容器中备用，防止试样成分变化。了分析步骇7.1试样测定(配合饲料、浓缩料、单一饲料)称取已制备好的试样约1g，精确至。0001g((0.4pgSe)，放入50mL高型烧杯中，用少量水润湿试样加硝酸(4.2)10mL,轻摇烧杯使试样散开，加盖表面皿放到电热板(5.4)上低温加热见反应开

7、始(泡沫开始上冒)，切断电源或取下待剧烈反应缓解(气泡不上涌)后再放到电热板上煮沸至硝酸体积减少到5mL左右，取下稍冷加入5mL高氯酸(4.1)继续加热至剧烈小气泡冒完，高氯酸冒烟;取下稍冷，用水吹洗表面皿和杯壁，去掉表面皿，将烧杯置电热板上先低温蒸发水分，再升温至高氯酸冒烟并保持5^10min，取下稍冷，加入1mL水和1mL盐酸(4.4)，摇匀，放置10min，水稀至30mL左右，加二滴甲酚红(4.11)，用氨水(4.6)中和至黄色，再用盐酸(4.4)中和至橙色(pH1.5^-2)，加入3mL

8、盐酸羚胺溶液(4.7)摇匀，用盐酸(4.5)转移到50mL比色管中(5.6)，加2mLDAN溶液(4.8),盖好塞子，摇匀，松动塞子，置于100℃水中保持5min。取出放人冷水中迅速冷却至室温，用盐酸(4.5)稀至50mL，加5mL环己烷(4.3)振荡1min，静置分层后，用吸管小心吸取上部环己烷入1cm石英杯中，置入荧光光度计内于激发波长375^-380nm，发射波长520^-525nm测其荧光强度，在标准曲线上查得试料中硒的含量。同时做空白试验(消化时应戴防护眼镜)。7，2高含量硒样品(预混