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1、肌酐酶法测定的两点法分析摘要：目的：肌酐酶酶测定的两点分析。方法：通过两种试剂进行比较。反应温度为37℃，波长为500～520纳米(主)/650纳米(次)；标准为15毫升；样品也为15毫升；试剂Ⅰ：200毫升，孵育时间为300秒；试剂Ⅱ：50毫升，第一点读数时间为120秒，第二点读数时间为300秒。结果：酶法具有去除肌酸的干扰能力，有线性范围宽，精度高等特点。结论：两点法对肌酐酶法测点有良好的作用。关键字：肌酐酶法两点法对于酶法测定肌酐，目前已报告的有四种方式，其中三种均为紫外测定，一种为比色测定。然而，在相比之下比色测定在除去肌酸的干扰能力、线性范围、精
2、度等具有更高的优越性；市场上出售的商品试剂盒大多采用此法。但fossati原法的反应时间比较长，且要做一血清空白以除去血清中肌酸的干扰，这样不适合进行自动分析。自动分析的一般反应时间为十分钟，为了除去肌酸的干扰必须采用两步法，反应时间要求在五分钟内达到。根据实验。必须将几种工具酶的用量增加到fossati原法的五到十倍。然而，在实验过程中发现几种工具酶的水解速率均比较缓慢，反应的线性时间比较长；所以，将其改成两点法或是速率法测定，会取得很好的实验结果。这也体现出两点法的优势。1原理第一步反应：排除肌酸干扰第二步反应：测定肌酐2材料与方法2.1仪器：自动分析
3、仪HITACHI7170，BeckmanSynchron△CX5和CibaCoringExpressPlus。分光光度计BeckmanDU-640。2.2原料试剂：原料试剂采用的工具酶比较多，如：肌酐酰氨基水解酶，肌酸脒基水解酶，肌氨酸氧化酶，棘根过氧化物酶，抗坏血酸氧化酶，这些工具酶均为BoehringerMannheim公司产品。3，5-二氯-2-羟-苯磺酸(DHBA)，4-氨基安替比林(4-AAP)和肌酐，均选用适量的剂量。2.3应用试剂：试剂Ⅰ：每升磷酸盐缓冲液(150Mmol/L,pH为7.5)中含CRTase20kU,SO6kU，POD1kU,
4、ASO1kU,DHBA3Mmol,K4Fe(CN)620Mmol,和4-AAP4Mmol。试剂Ⅱ：每升含CRNase50kU。参考物(177Mmol/L):精确称取肌酐20毫克溶于1升经透析的混合血清中。2.4测定方法：自动分析通用参数、反应类型、两点法，反应温度为37摄氏度，波长为500～520nm(主)/650nm(次)；标准为15毫升，样品为15毫升，试剂Ⅰ：200毫升，孵育时间300秒；试剂Ⅱ：50毫升，locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination
5、.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame第一点读数时间：120秒，第二点读数时间300秒。2.5比较方法：采用比较的方法对其进行比较，BoehringerMannheim的肌酐酶法测定试剂盒，按照说明书上的要求进行测定。3实验和结果3.1去除肌酸干扰的能力：选择肌酐含量为495Mmol/L的样品一份,分别加入肌酸34、67、101、134Mmol
6、/L用本法测定,结果分别为497.6、495.8、492.7、489.1Mmol/L,说明通过第一步反应至少能够去除134Mmol/L的肌酸。3.2反应动力学曲线：选择不同浓度的样品按测定方法中的参数将样品和试剂Ⅰ进行混匀，在37℃水浴中300秒，然后加入试剂Ⅱ，立即用BeckmanDU-640分光光度计自动记录动力学曲线，说明样品浓度在2740Mmol/L(31mg/dl)以下时120-300秒间呈线性，数据表明，在此时间段内可以用两点法进行测定。3.3线性范围：按NCCLS(EP6-P)的评价方案,选择低值(97Mmol/L)和高值(2749Mmol/
7、L)样品各一份等量混合均匀产生中间值,再分别将中间值和低值、中间值和高值等量混合均匀,共产生5个不同值,用三种分析仪分别用两点法从低值到高值,然后从高值到低值进行测定,求得均值为Y,以理论值为X,进行回归分析，三种仪器的回归方程如下：Hitachi7170:Y=0.9912X+9.55,r=0.9999；BeckmanCX5:Y=1.0799X-32.56，r=0.998；Ciba-Coning:Y=0.997X-39.4，r=0.9987。结果均有很宽的线性范围。3.4精密度：按NCCLS(EP5-T2)的评价方法，选择88.7和752.3Mmol/L的
8、样品各一份，用BeckmanDU68分光光度计每天上下午双份进行测
