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时间:2018-08-24
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1、SOP标准操作程序LDH乳酸脱氢酶(货号:OSR6127,OSR6227)实验原理:在心肌损伤、肝脏疾病、巨细胞贫血、肺栓塞、恶性脓包、皮肤炭疽、肌营养不良等疾病中测定LDH(EC1.1.1.27)。测定LDH并结合测定CK肌酸激酶及同功酶能确诊急性心肌梗塞。方法学:Olympus公司LDH的测定方法采用的是改良Wacker法,反应方向中乳酸转化为丙酮酸。乳酸与NAD在LDH作用下转化为丙酮酸与NADH。NADH在340nm下有强吸收,但NAD没有吸收。在340/380nm下测定吸光度的变化可以测定标本中LDH的活性。LDH乳酸
2、+NAD-------------﹥丙酮酸+NADH+H标本:病人准备:无特殊要求。类型:无溶血的血清或肝素化的血浆。凝固后尽快分离血清,尽量避免溶血。标本准备:各种不同的研究表明,LDH在不同温度下稳定性各不相同。尽管结论各不一致,但比较一致认为心脏同功酶比肝脏同功酶更加稳定。在任何性情况下,标本收集贮存要有合适的操作程序使结果一致。最好不要放在冰箱或冰冻,在室温应尽快测定。仪器与材料:仪器:奥林巴斯AU640生化分析仪材料:奥林巴斯AU640乳酸脱氢酶(LDH)参与反应成份的最终浓度:AMP缓冲液(PH8.9)230mmol
3、/LL-乳酸70mmol/LNAD10mmol/L其中含有稳定剂与保护剂。注意:1.此试剂为体外诊断用。2.不要入口,吞下有害。保护剂为叠氮钠,与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物,如果排向下水道请用大量的水冲洗。试验用试管的直径在12~16mm。试剂准备:奥林巴斯AU640的LDH试剂是即开即用的。无需特殊准备。执行参数(性能参数):以下数据是根据奥林巴斯AU640LDH试剂已经建立的程序。重复性:重复性的评估是根据NCCLS推荐的典型方法,AU640批内重复性小于3%,总不精密度小于5%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的
4、NCCLS的规则。N=100批内精密度总精密度平均值(U/L)SDCV%SDCV%1010.70.72.22.21741.30.83.62.14172.40.67.51.8locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissed
5、fatal,whennightcame方法学比较:奥林巴斯AU640LDH(方法1)与其它奥林巴斯分析仪器(方法2),共同做182个病人标本。相关系数达到0.998,回归方程如下:LDH方法1=(LDH方法2×1.04)-0.8病人结果数值分布:48~821U/L敏感度:在奥林巴斯AU640生化分析仪上每分钟变化0.09毫吸光度为1U/L。试剂的贮存:1.当保存于2~8℃,不开盖情况下至标签的失效期。2.开盖后放于仪器中可以稳定30天。变质指示:当试剂有浊度时,不能继续使用。校准:标准液的准备:这个实验不需要标准液。校准程序:L
6、DH的校准中基于NADH的摩尔消光系数,在340nm为6300。质控:在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控(DR0061&62)做为未知标本进行分析。操作程序(逐步地):AU640开机1.认两瓶清洗剂有足够的量。2.打开蒸馏水供应系统的阀门。3.如果没有设定自动开机,请按分析仪器上的[POWERON]键。4.确认打印机为开机并处于联机状态。5.在[StartCondition]屏幕,输入所需信息,并按F2退出。6.如果有需要请进入password。7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量(体积)是否充足,不足请添加并
7、在系统状态中的试剂状态检查试剂。8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1NHCL的样品针清洗液。开始分析:1.把定标、质控、和标本架放在仪器的RackFeed上。2.用鼠标点击在屏幕最上方[开始分析]图标。3.点击F2退出键退到主屏幕。分析参数样品体积3微升吐水量0微升试剂I体积80微升吐水量0微升试剂II体积40微升吐水量40微升波长340/380方法Rate读点14/21温度37℃完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。计算:无需手工计算,结果为在37℃自动以U/L打印。报告结果:参考范围:140~27
8、1U/LlocatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(Wuzhensaid
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