(sop-qc-003-03)_lowry法检测蛋白质含量标准操作规程[1]

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1、标准操作规程StandardOperationProcedure吉林大学研发中心lorry法测蛋白质含量标准操作规程编号SOP-QC-003-02Lowry法检测蛋白质含量1.目的：保证产品蛋白质含量测定按规范进行和检定结果的准确可靠。2.依据：2005年版中华人民共和国药典（三部）。3.试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。4.器皿与耗品：所有玻璃器皿为清洁级，37度烤干。tube、tip：一次性使用，容量瓶，96孔酶标板，5.仪器设备：酶标仪：旋涡混匀器。6.溶液的配置：6.1.4%碳酸钠溶

2、液：称取4g碳酸钠,加水90ml,搅拌，使完全溶解，并定溶至100ml。贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为一个星期。6.2.0.2mol/L氢氧化钠溶液：称取0.8g氢氧化钠,加水90ml,搅拌，使完全溶解，并定溶至100ml。贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为一个星期。6.3.0.04mol/L硫酸铜溶液：称取1g硫酸铜(CuSO45H2O)(分析纯),加水90ml,搅拌，使完全溶解，并定溶至100ml。贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为一个星期。6.4.0.1mol/L酒石酸钾(或0.1mo

3、l/L酒石酸钠)：称取2g酒石酸钾(或酒石酸钠),加水90ml,搅拌，使完全溶解，并定溶至100ml。贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为一个星期。6.5.碱性铜液：临用前取试剂6.1（Na2CO3）和6.2（NaOH）各5ml，试剂6.3（硫酸铜）和6.4（酒石酸钾）各0.1ml混匀配制而成，即用即配。6.6.酚试剂：商品化：注意酚需要稀释到1mol/LlocatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linp

4、ing,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame标准操作规程StandardOperationProcedure吉林大学研发中心lorry法测蛋白质含量标准操作规程编号SOP-QC-003-02标准品来源：人血清白蛋白标准品HSA(中检所).1.1.配制标准品标准程序：参照《蛋白国家标准品使用说明书》取人血清白蛋白（HS

5、A）一支（21.24mg），先用超纯水溶解，定容到一洁净的25ml容量瓶中，摇匀，取23.54ml，再用一洁净的干燥的25ml容量瓶定容，即为浓度为800ug/ml浓度的标准品。用2mltip管分装，250ul/支，冻干。保存于-20度使用时，取1支冻干标准品，加入0.5ml超纯水，配制成200ug/ml标准品备用。1.2.标准品规格冻干的标准品每管200ug，加入0.5ml超纯水配成200ug/ml。（每次实验需要2支）1.3.标准品的鉴定用原有的标准品做标准曲线，随机取三支本分装品为样品，测定样品蛋白含量，得

6、X±SD（其中X单位为ug/ml）与RSD,当X值为98-102，且RSD值小于等于2%者，认为该标准品的标示浓度为200ug/ml。1.4.工作标准品的配制取冻干标准品一支（200ug）加入0.5ml纯化水，完全溶解，混匀,标注为200ug/ml2.程序：2.1.样品的处理2.1.1.一次检测过程包括标准不能超过20个样品。若是原液或成品,每个样品需做2个或3个稀释度：V水＝V原（d－1）其中V水为需要加入纯化水的体积，V原为稀释前样品的体积，d为稀释度2.1.2.待测样品如为冻干品，则根据标示量稀释至1mg/

7、ml，再稀释10倍；待测样品如为未知浓度的样品，可以根据bradford标准品颜色目测后稀释样品。2.1.3.待测样品均需溶解后先离心，再进行稀释和检测操作。2.1.4.稀释后的样品需做同样的三个反应体系。2.2.标准曲线的制备（见6.11工作标准品的配制）locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(Wuzhensaidinf

8、ormationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame标准操作规程StandardOperationProcedure吉林大学研发中心lorry法测蛋白质含量标准操作规程编号SOP-QC-003-02管号123456配制工作标准品浓度(ug/ml)20016012080400200ug/