生物显微技术实验指导

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1、实验一石蜡切片技术——取材、包埋一、实验目的掌握制作石蜡切片中取材、包埋的基本操作技术。二、实验用品1、实验材料：鱼2、实验试剂：10%甲醛溶液（40%甲醛10ml，蒸馏水90ml）、50%酒精、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、石蜡。3、实验器具：解剖器，双面刀片，小瓶，牛皮纸、电热恒温箱、脱水机、包埋机。三、实验步骤1、取材：用任何杀生的方法把鱼杀死，将腹腔打开，切取0.5cm3左右大小的肝脏、肠等组织。2、固定：将切好的组织直接投入10%甲醛固定液中，固定24h。3、脱水：50%酒精→70%

2、酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。每级1-2h。70%酒精处可长期保存。4、透明：1/2二甲苯+1/2100%酒精(1-2h)→纯二甲苯(1h)→纯二甲苯(1h)5、浸蜡：石蜡先置于60℃的温箱中，倒入含二甲苯及材料的小瓶中置于37℃温箱中，放置2-4小时。6、包埋：先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，

3、也可在凉水盆中放置过夜。四、作业分析总结石蜡切片技术中固定和包埋的操作注意事项有哪些？附：折纸盒按下列顺序折叠：(1)折AA'及BB'；(2)折CC'及DD'；(3)折CE'与AE'、向外夹出EE'。同样折出FF'，GG'及HH'；(4)使CE'E与E'IE两三角形相叠，并沿E'C和EI重叠的折痕向后转折。同样折其余三只角；(5)折RIJF向外，同样折出GKLH，即折成所需的纸盒。实验二石蜡切片技术——切片、贴片一、实验目的掌握制作石蜡切片中切片、贴片的基本操作技术。二、实验用品：1．实验试剂：95%酒精、100%酒精、二甲苯、明胶

4、液、蒸馏水。2．实验器具：切片机、展片机、烤片机、载玻片、盖玻片、酒精灯、毛笔、牛皮纸、刀片、解剖刀、台木。三、实验步骤：1．修块、粘块、整修的步骤：（1）选取所要切片的材料，从包埋的石蜡块上用单面刀片切割下来，注意不可损伤包埋的组织。（2）确定切面的方位，用刀片将石蜡块的四面作初步的整修。保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。（3）点燃酒精灯，并准备一把旧的解剖刀。（4）左手大拇指与食指间持整修好的石蜡块，材料向上用其余三指夹住台木。此时将解剖刀在酒精灯上加温后，即放在台木与石蜡块之间，因解剖刀已加温，遇上两面

5、的石蜡都会融化，可立即将解剖刀抽出，石蜡块迅速压在台木上。（5）再将解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，放在刚才固定的石蜡四周。此时，解剖刀再加温，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平。使石蜡块牢固地粘在台木上。（6）修石蜡块上下面平行，使切成的蜡带呈一直线，不弯曲。每个切片中组织的距离接近。2．切片的方法：（1）准备下列用具：毛笔、牛皮纸（2）将已固着和整修好的石蜡块和台木装在切片机的夹物部分.（3）安装切片刀，将刀片夹在刀夹上，并调整好刀的角度。刀的斜度，非常重要，最好先切除的蜡块试刀，以确定刀的斜度，一经调度适合后，就不要随便变动，以免每次试刀的

6、麻烦。（4）移动刀片固定器，使夹刀部与夹物部之间的距离调整好，以石蜡块的表面刚贴近刀口为度，在旋紧切片固定器的螺旋。（5）调整石蜡块与刀口之间的角度与位置。修整蜡块，将刀片移近蜡块，使小蜡块的下边与刀锋平行，如不平行，可调夹物部上的螺旋。然后把它固定，再转下蜡块．呈矩形才行。只有平整的蜡块，才能切出平整的蜡带。（6）最后根据需要，调整控制切片厚度的机制。调度后，把它固定下来。上述四步骤完成后，就可进行切片，（7）开始切片。右手握旋转轮的手柄，摇动一转就可切下一片，切下的蜡片粘在刀口上，待第二片切下时粘在一起，所以连续摇动就可将切下的

7、蜡片连成一条蜡带。这时左手就可持毛笔将蜡带提起，边摇边移动蜡带。转速为每分钟40-50为宜。（8）切成的蜡带到20-30厘米时，即以右手用另一只毛笔轻轻将蜡带挑起，平放在牛皮纸上。靠刀的一面较光滑，应向下，较皱的一面向上。（9）切下的蜡片是否良好，此时应先行检查。（10）切片工作结束后，仍将刀片用具擦拭干净。3．贴片：贴附牢固，在染色时不易脱落；使皱褶的蜡片伸展平整。用具：载玻片、粘片剂、解剖刀、蒸馏水、展片机及烤片机。材料切成薄片后，须将切片粘在玻璃片上，加热展开，这叫粘片。所用载玻片必须清洁才能使用。粘片时，需把胶液置簿玻片上，

8、再取切片，浮置胶液上，然后置烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编号，放入温箱中烘干，温度30～40℃约1小时即干。（1）将展片机温度调整到35℃，保持恒定。（2）在