体内药物分析薄层色谱法

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1、色谱法色谱法是一种物理或物理化学的分离分析方法，其分离原理主要是利用物质在流动相和固定相中的分配系数、或吸附能力等的差异而得到分离。随着临床药学的迅速发展，色谱法在体内药物分析中的应用更为广泛，具有不可取代的重要地位，已成为体内药物分离检测最重要的方法1液相色谱法是应用最广的分离分析方法，特别是对于复杂样品的分析尤为重要。液相色谱法的分支很多，广义的液相色谱法包括：高效液相色谱法、薄层色谱法、超临界流体色谱法、毛细管电泳法等类别，而它们又各自包括多种方法。色谱法包括纸色谱、薄层色谱、凝胶色谱、气相色谱

2、和液相色谱2第一节薄层色谱法（TLC）是指将固定相均匀地涂布在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属膜等表面上形成薄层，将被分离物质点在薄层板的一端，置展开室中，展开剂借毛细管作用从薄层点样的一端展开到另一端，在此过程中不同物质可以进行色谱分离。根据不同的分离机制，薄层色谱法可以分为吸附薄层色谱、分配薄层色谱、离子交换薄层色谱和凝胶薄层色谱。3薄层色谱的特点：可以同时平行分离多个样品；分析成本低；对样品预处理要求低；薄层板一次性使用，对样品要求不高；对固定相、展开剂的选择自由度大。传统的TLC法缺点：展开时间

3、长、展开剂体积需求大和分离结果差等。其色谱结果易受铺板质量、点样技术、展开剂配制、层析环境中展开剂的饱和度、环境温、湿度等因素的影响，有时难于重复；显色易受均匀性、灵敏度、稳定性等影响，这均使测定结果偏差较大。4是近年来迅速发展的一种高效、快速、操作简便、结果准确、灵敏度高和重现性好的薄层色谱新技术，它采用更细、更均匀的改性硅胶和纤维素等为固定相，对吸附剂进行疏水和亲水改性，可以实现正相和反相薄层色谱分离，提高了色谱的选择性，已广泛用于各个领域。高效薄层色谱法highperformancethin-l

4、ayerchromatography(HPTLC)与传统TLC相比，高效薄层色谱法在薄层制备、展开方式、分析鉴定手段以及相配套的仪器设备等方面进行了许多改革，其中最根本的是固定相的改进。56而在TLC、HPTLC和UPTLC三种规格的预制硅胶薄层板中，又以HPTLC最能体现出薄层色谱分析效率高且经济实用的特点。其应用在目前的科研和日常分析中越来越得到普及。无定形HPTLC硅胶的平均粒径和粒径分布范围相对TLC有较大改善，以较短的展开距离和时间就可以获得较高的理论塔板数和分离度。由于成分斑点更为集中，因

5、此所需的有效涂层厚度也大为减少，检测灵敏度也因而较TLC有一个数量级的提高。7C18：弱极性Diol:二醇醚改性CN：丙基腈改性NH2：丙氨基改性891011两个基本要求：第一，点样位置需精确；第二，尤其对于定量分析，点样体积需要精确和准确。点样为了提高分离效率，原点在展开方向应该尽可能小，对于HPTLC，应小于1.5mm，点状点样：体积受到严格限制。在HPTLC板上点状点样体积通常为0.1-1μL。溶剂在板上扩散会“环形色谱”。非接触喷雾式条带状点样：均匀，可提高解析度和检测限。由于HPTLC扩散小

6、，10*10cm板可点16个样品1213薄层色谱有别于其他色谱技术，除了都有固定相和流动相外，还存在气相。气相会对分离结果产生显著影响。展开室预先用展开剂饱和展开距离由于TLC中流动相的速度不是固定的，而是随展开时间和展开距离增加而降低，所以展开距离有一定限制。通常在HPTLC板上5cm展距分辨率较高展开141、显色剂显色法：喷雾显色，借助喷雾器喷细雾至板面湿润。2、紫外线照射法：如AFTB1在WL365nm观察；3、对本身是有色的斑点则不需显色。显色151、定性：斑点显色后量出高度，求得Rf值2、定

7、量方法目视直接比较法洗脱测定法薄层扫描法定性定量16薄层扫描法一般由薄层扫描仪完成。该仪器一般由下列部分组成计算机、光源、单色光器、监测器、打印机、记录仪。按测定方法分可分为透射法、反射法。按其扫描方式可分为线性扫描法、锯齿扫描法、飞点扫描法或称之为微光点快速扫描法。瑞士和日本岛津类型仪器所采用的是锯齿扫描或飞点扫描法。目前是以锯齿扫描和飞点扫描法为佳。17181920瑞士卡玛CAMAG公司的仪器全自动、半自动、手动点样仪条带状喷雾式样品点样21CAMAG全自动展开仪（ADC2）薄层板切割器:22西洋

8、参在UV366下的色谱图（指纹图谱）Visualizer数码成像系统23薄层色谱扫描仪、工作站可进行薄层色谱光密度分析一整套仪器要30多万人民币24例子：高效薄层色谱法测定人血清中盐酸胺碘酮盐酸胺碘酮为临床上常用的抗心律失常药物，其治疗指数低．安全范围窄，且个体差异大，为了解治疗效果与血药浓度的关系，我们建立高效薄层色谱法(HPTLC)。本法操作简便易行，不失为临床盐酸胺碘酮监测的有效方法。25供试品溶液的制备精密量取血清1.0mL置磨口试管中，加入l.