302 培养液的配置方法

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1、美国JRH公司EX-CELLTM302无血清培养基配制方法磁力搅拌器EX-CELLTM302无血清培养基订货号：干粉培养基：24324（含酚红）、24326（不含酚红）液体培养基：14324（含酚红）、14326（不含酚红）（酚红含量为0.00657g/L）必需的仪器及试剂：磁力搅拌器、pH计或pH试纸，1N氢氧化钠，1N盐酸请严格按照以下步骤溶解制备无血清培养基1.确保用于制备无血清培养基的超纯水的水温处于20～30摄氏度，并以25度为最佳，并且在整个溶解配置过程中注意维持水温在20度以上（推荐水浴保温，但是不推荐使用直接电加热和火焰加热的方式）；2.准确称量需要溶

2、解制备的EX-CELLTM302无血清培养基干粉总量，配置每升培养液需要称取21.21克的培养基干粉（21.21g/L）；3.将配制培养基液体的容器置于磁力搅拌器上，在容器内加入相当于最终体积80%~90%的超纯水（细胞培养级），并且在搅拌的条件下（搅拌所形成的漩涡，要向下深入到液面以下，达到相当于整个液面以下四分之三的位置为佳，如右上图所示）逐渐分批地加入培养基干粉。在上一部分加入的培养基干粉基本溶解后，再加入下一部分的培养基干粉；注意：是把培养基干粉加入到水里，而不是把水加到培养基干粉里去！！4.用少量的超纯水（细胞培养级）冲洗清空后的盛放培养基干粉的容器，使剩余

3、的微量培养基粉末都加到溶液中；5.继续搅拌直至培养基干粉彻底溶解。搅拌所形成的漩涡，要向下深入到液面以下，达到相当于整个液面以下四分之三的位置为佳，如右上图所示；6.对于EX-CELL302的编号为24324的培养基，加入1.6g/L的碳酸氢钠（JRH订货号90421）或21.3ml/L的7.5%的碳酸氢钠溶液（JRH订货号59221）；对于EX-CELL302的编号为24326的培养基，加入1.6g/L的碳酸氢钠（JRH订货号90421）或21.2ml/L的7.5%的碳酸氢钠溶液（JRH订货号59221），持续搅拌直到完全溶解；7.在搅拌的条件下，用1N当量的NaO

4、H溶液或1N当量的HCl溶液调节pH到6.9~7.1，不要过度调节pH，以免加入过量的NaOH和HCl；8.在过滤后，此溶液的pH值会上升0.1~0.2个单位。对于大多数细胞培养要求来说，经过过滤以后的培养液的pH值以7.0~7.4为佳；9.加入超纯水（细胞培养级），补足溶液到最终体积。持续搅拌至少60分钟以上；10.为了避免pH值的变化，在过滤之前，应将培养液密闭暂存；11.对培养液进行除菌过滤时，应使用孔径为0.45um复合0.20um的低蛋白结合能力的双层滤膜进行过滤，推荐使用德国赛多利斯公司的醋酸纤维素材质（CA）的过滤器。12.为防止CO2丢失，推荐使用蠕动

5、泵或惰性气体（例如氮气）以提供2～15psi的正压；不要使用CO2气体；13.需要添加L－谷氨酰胺的，在培养液使用前添加20ml/L的200mM浓度的L－谷氨酰胺溶液（JRH订货号59202），使其工作浓度达到4mM。14.在无菌条件下分装培养液到合适的无菌容器中，培养液要低温（2～8度）避光保存。