显微镜的使用及涂片染色技术

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1、明视野显微镜的原理及使用1、定义：通过聚焦镜汇聚到样品上，因而形成一个锥形的明亮光束并通过样品进入物镜的显微镜。用于观察经染色或本身具备颜色的细胞、组织片等标本。明视野显微镜是最通用的一种光学显微镜。2、组成部件⑴机械系统部分①镜座显微镜的基本支架，由底座和镜臂组成。②载物台支持被检标本的平台。③镜筒空心的圆筒，装置于镜臂上端，上接目镜，下接转换器。目前，显微镜多见斜筒式，特别是双镜斜筒的，使观察时眼睛不易疲劳，用起来方便。④转换器位于镜筒的下端，是一个可以旋转的圆盘，用于装物镜。镜检时，转动转换器转换物镜。⑤调焦装置包括粗细调焦旋钮，是调

2、节载物台上下移动的装置。它是获得清晰图像的关键。粗调只做粗略的调焦，对低倍观察仅用粗调就能获得清晰图像，在采用高倍镜和油镜时，粗调获得模糊物象后，还需细调才能看清物象。⑵光学系统部分①物镜分为干燥系物镜（放大60倍以下的物镜）和油浸系物镜（放大100被的物镜）。干燥系物镜和标本之间的介质是空气；油浸系物镜与标本之间必须加入香柏油才能观察到清晰物象。物镜的放大倍数常有8×、10×、20×、40×、60×、100×。一般光学显微镜仅有其中的3-4种。②目镜插入镜筒上端，供眼睛观察物象用。一般目镜镜筒越长，放大倍数越小。常有3×、5×、8×、10

3、×、15×等种数。③集光器可以上下移动，以调节最适光度，附有的虹彩光圈，用于调节光线的强弱。3、使用方法及注意事项。⑴观察任何需要镜检的标本都可以先用低倍镜观察，找到目标物，然后旋动转化器转换成高倍镜观察，再适度旋转细调焦旋钮，就能观察到目的物象。⑵油镜的使用镜检细菌及真菌菌体形态时需采用放大100被的油镜。需要在标本与镜头之间滴加香柏油。镜检完毕后，先用插镜纸将镜头上的香柏油擦去，再用擦镜纸蘸少许二甲苯，将镜头上残留的香柏油擦去，并将二甲苯擦去。使用次数比较少的显微镜，如果忘记擦除油镜上的香柏油，油干后极难擦除，会直接损坏油镜，因此务必记

4、得擦拭油镜。⑶显微镜的总放大率是物镜和目镜放大倍数的乘积。⑷未经染色处理的生物标本，由于对光线的吸收很少，造成反差低的影像，不利于明视野显微镜观察。使用染料对生物标本染色后增加了反差，成为明视野显微镜的主要观察对象。染色与制片技术1、为什么镜检的标本都要染色处理？一般的微生物细胞含水量都在80——90%，因此细胞对光的吸收和反射与水溶液相差不大，特别在油镜下观察时细胞与背景几乎没有反差，呈现一片透明状态。所以在观察微生物细胞的一般构造及特殊构造时都采用染色法，目的是通过细胞对染料的吸着所产生的与背景较明显的明暗差，便于观察。2、碱性复红如何

5、配置？0.3g碱性品红加5g石碳酸溶于95%乙醇10ml中，加水至100ml即可。3、单染色操作步骤及注意点有哪些？⑴实验材料：酒精灯，接种环，显微镜，香柏油，洗瓶。⑵操作步骤a)涂片干燥取一块干净的载玻片，用酒精灯灼烧接种环直至发红，完后蘸取菌液，涂到玻片上，涂匀即可，需要观察食用菌菌丝的生长情况，也可挑起一些絮状的菌丝涂到玻片上。b)固定固定常用高温，手持载玻片，标本面朝上，在火焰外层快速来回通过，要求玻面温度不超过60℃，此时以手背皮肤接触不觉得过烫为度，将玻片上的菌液及菌丝烤干至牢牢的贴伏。放置待冷后染色。固定的目的是：1、杀死微生

6、物，固定其细胞结构。2、保证菌体能牢固的粘附在载玻片上，因而可防止标本被冲洗掉c)染色滴加碱性复红染液覆盖，染色30s。碱性复红染色液着色快、时间短，菌体呈红色。d)水洗掉染液，吸干。e)油镜观察菌丝形态及污染情况。