聚谷氨酸的检测方法

《聚谷氨酸的检测方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、聚谷氨酸测试方法1.0适用范围：本方法适用于聚谷氨酸半成品及成品的HPLC纯度分析(第4段、第5段中，蓝字为食品级及化妆品级PGA纯品粉末的样品制备方法;红字为PGA发酵液的样品制备方法)2.0仪器与设备：2.1Pump：SHIMADZULC-10AT2.2Autosampler：PERKINELMERseries200autosampler2.3Column：TOSOHTSKGuardcolumnTOSOHTSK-GELG6000PWXLTOSOHTSK-GELG3000SW2.4Detector：PERKINELMER785AUV/VISDetec

2、tor3.0试剂的制备3.10.05MNa2HPO4(disodiumhydrogenophosphate,MW.141.96g/mol)称取Na2HPO47.1g，加入去离水800mL溶解，最后以去离水定容至1L。3.20.05MNaH2PO4•H2O(Sodiumdihydrogenophosphatemonohydrate,MW.137.99g/mol)称取NaH2PO4•H2O6.9g，加入去离水800mL溶解，最后以去离水定容至1L。3.3磷酸缓冲溶液，pH7.0将0.05MNa2HPO4与0.05MNaH2PO4•H2O以约10：7的比例混

3、合，微调至pH7.0，以0.45μm滤膜过滤。4.0PGA样品前处理4.1称取PGA样品0.04-0.05g置入50mL烧杯中。4.2加入40mL的0.05MNa2HPO4溶液。4.3利用磁石搅拌使样品完全溶解。4.4移入50mL定量瓶，以0.05MNa2HPO4溶液定容至50mL。4.5以0.45μm滤膜过滤，装入样品瓶中。4.6将样品放入HPLC分析。5.0发酵液样品前处理5.1称取发酵液2g置入100mL烧杯中，加入去离子水80mL，利用磁石搅拌均匀。5.2以1NH2SO4调整pH4.0。5.3移入100mL定量瓶，以去离子水定容至100mL。5

4、.4取离心管秤取样品约80g（重量包含离心管、盖、标签、样品）。5.5利用高速离心机将菌体及杂质分离。离心条件为：转速12,000rpm，时间10min，温度控制在4℃下。5.6离心后取上层液，以0.45μm滤膜过滤后，装入样品瓶中。5.7将样品放入HPLC分析。6.0标准品配制6.1称取PGA标准品1g，加入0.05MNa2HPO4溶解，最后定容至100mL，作为PGA标准稀释溶液，浓度为10000μg/mL。6.2取5只50mL定量瓶，分别加入PGA标准稀释溶液(10000μg/mL)1、2、3、4、5mL，以0.05MNa2HPO4定容至50mL

5、，其各点浓度分别为200、400、600、800、1000μg/mL。(分装储存于-20℃，使用时取出解冻，分析完后丢弃)6.3分别以0.45μm滤膜过滤，装入样品瓶中，待上机分析。7.0HPLC分析条件Column：TOSOHTSKGuardcolumnTOSOHTSK-GELG6000PWXLTOSOHTSK-GELG3000SWMobilephase：磷酸缓衝溶液，pH7.0Flow：0.5mL/minDetector：UV220nm7.1标准品与样品分别以Autosampler取20μl注入HPLC作定性定量分析。7.2另作空白组，操作步骤同检

6、液。7.3以波峰面积为纵座标，γ-PGA-H标准品的含量为横座标，绘制标准曲线，并建立线性回归方程式。7.4将样品的波峰面积数值，代入标准品线性回归方程式中，求得γ-PGA样品溶液的浓度，再带入计算公式，换算γ-PGA纯度。8.0计算γ-PGA样品溶液的浓度以回归方程计算y=ax+bx＝(y－b)/aa：斜率b：截距y：样品的波峰面积x：样品的浓度,μg/mLγ-PGA的纯度(%)=×100=（C樣×D.F）/W×100C样：样品的浓度(μg/mL)D.F：样品的稀释倍数W：称取样品重量,μg作为拌种剂使用一般稀释5-10倍拌种。