环工微生物实验指导书

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1、环境工程微生物学实验指导书环境与市政工程学院环保实验室2007年7月28日15实验一光学显微镜的操作及测微尺的使用一、实验目的1.掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养2.观察细菌的形态，并学会测量细菌的大小。二、实验原理1．显微镜的结构和各部分的作用显微镜分机械装置和光学系统两部分(图1—1)。(1)机械部分①镜筒：镜筒上端装目镜，下端接转换器。镜简有单筒和双筒两种。双筒者可调节两筒之间的距离，以适应不同瞳距者使用。②转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个或5个孔。不同规格的物镜分别安装在各

2、孔上。③载物台：载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。两旁有弹簧挟用以固定标本或载玻片。有的载物台上装有自动推物器。④镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。镜臂有固定式和活动式(可改变倾斜度)两种。⑤镜座：镜座为马蹄形，支撑整台显微镜，其上有反光镜。⑥调节器：调节器包括大、小螺旋调节器(调焦距)各一个。可调节物镜和所需观察的物体之间的距离。(2)光学部分①目镜：一般使用的显微镜具有2—3个目镜，其上常刻有“5x”、“l0x”或“15x”等数字及符号，意即使用时可放大5倍、l0倍或15倍。观察微生物

3、时常用放大l0倍或15倍的目镜。15②物镜：物镜装在转换器上，可分低倍镜、高倍镜和油镜三种，其相应的放大倍数常是10、40、100。物镜的性能由数值孔径(numericalaperture，N．A．)决定，数值孔径＝n.sinα/2．其意为玻片和物镜之间的折射率n乘上光线投射到物镜上的最大夹角α的一半的正弦。光线投射到物镜的角度越大，显微镜的效能越大，该角度的大小决定于物镜的直径和焦距。n是影响数值孔径的因素，显微镜的总放大倍数为物镜放大倍数和目镜放大倍数的乘积。⑦聚光器：聚光器安装在载物台的下面．反光镜反射来的光线通过聚光

4、器被聚集成光锥照射到标本上，可增强照明度，造成适宜的光锥角度，提高物镜的分辨力。聚光器可上、下调节，以求得最适光度。案光器还附有虹彩光圈，推动把手可随意调整透进光的强弱。合理调节案光器的高度和光圈的大小，可得到适当的光照和清晰的图像。④反光镜：反光镜装在镜座上，有平、凹两面，光源为自然光时用平面镜，光源为灯光时用凹面镑。它可自由转动方向。反光镜可反射光线到聚光器上。有的显微镑不具反光镜，使用的是电光源。⑤滤光片：可见光由各种颜色的光组成，不同颜色的光线波长不同。如只需某一波长的光线时，就要用滤光片。选用适当的滤光片，可以提高

5、分辨力，增加影像的反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色，分别透过不同波长的可见光，可根据标本本身的颜色，在聚光器下加相应的滤光片。三、实验装置与设备1.实验设备（1）生物显微镜。（2）测微尺四、实验步骤1．显微镜使用方法(1)低倍镜的使用法a.置显微镜于固定的桌上。b.旋动转换器，将低倍镜移到镑筒正下方，和镜筒对直。c.转动反光镜向着光源处，同时用眼对准目镜仔细观察，使视野亮度均匀。15d.将标本片放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔正中。e.将粗调节器向下旋转(或载物台向上旋转)，眼睛注视物镜，以防物

6、镜和载玻片相碰。当物镜的尖端距载玻片约0.5cm处时停止旋转。f.左眼向目镜里观察，将租调节器向上旋转，如果见到目的物．但不十分清楚，可用细调节器调节，至目的物清晰为止。g.如果粗调节器旋转得太快，使超过焦点，必须从第e步重调，不应正视目镜情况下调粗调节器，以防没把握的旋转使物镜与载玻片相碰撞坏。h.观察时两眼同时睁开，如用左眼看显微镜，有眼看桌上纸张，便可一面看一面画出所看到的物像。(2)高倍镜的使用法①使用高倍镜前，先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至视野正处。②旋动转换器换高倍镜，如果高倍镜触及载玻片应立即停止旋动，说

7、明原来低倍镜就没有调准焦距，目的物并没有找到，要用低倍镜重调。如果调对了,换高倍镜时基本可以看到目的物若有点模糊，用细调节器就清晰可见。(3)油镜的使用方法①如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。②在载玻片上滴一滴香柏油(或液体石蜡)，将油镜移至正中使油镜镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。用细调节器微微向上调(切记不用粗调节器)即可。③用油镜观察完毕，用擦镜纸将镜头上的油擦净、纸蘸少许二甲苯擦试镜头，再用擦镜纸揩干。(4)显微镜的保护法①显微镜应放在干燥的地方，使用时需避免强烈的日光照射

8、。②物镜和目镜不清洁时，应当用擦镜纸或软绸揩干。③用完显微镜后，应当立即放到镜匣中。2．目测微尺、物测微尺及其使用方法(1)目测微尺目测微尺是一圆形玻片，其中央刻有5mm长的、等分为50格(或100格)的标尺，每格的长度随使用目镜和物镜的放大倍数及镜筒长度而定。使用前用物测微尺标定，用时放