园艺植物基因工程试题

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1、1.基因工程的四大要素是、、和。目的基因，工具酶，载体，受体细胞2．乙醇沉淀DNA的原理是。乙醇使DNA分子脱水3．在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素主要有、和。核酸酶降解，化学降解，物理剪切4.基因工程是在上世纪年代发展起来的遗传学的一个分支学科。Cohen等在年构建了第一个有功能的重组DNA分子。碱法分离质粒DNA时，溶液Ⅰ的作用是，溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的作用分别是使DNA。悬浮菌体，变性和复性。5．通常可在三种温度下保存DNA：4~5℃、-20℃、-70℃，其中以最好。-70℃1．关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确？

2、（d）（a）溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体（b）溶液Ⅱ的作用是使DNA变性（c）溶液Ⅲ的作用是使DNA复性（d）质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性2．同一种质粒DNA，电泳时，三种不同形式的迁移速度是（a）（a）SCDNA＞LDNA＞OCDNA（b）SCDNA＞OCDNA＞LDNA（c）OCDNA＞SCDNA＞LDNA（d）LDNA＞SCDNA＞OCDNA3．用碱法分离质粒DNA时，因为（c）所以可以被除去（a）染色体DNA断成了碎片（b）染色体DNA分子量大，而不能释放（c）染色体DNA变性后来不及复性（d）染色体末同蛋白质

3、分开而沉淀4.1953年Watson和Crick提出：（a）（a）多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋（b）三个连续的核苷酸代表一个遗传密码（c）遗传物质通常是DNA而非RNA（d）分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变1．外源基因（或DNA片段）插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。（×）1．PCR扩增的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样信息？PCR反应是在模板DNA、引物和dNTPs存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，它根据DNA半保留复制的原理，在体外模仿细胞内DNA复制的

4、过程，首先使模板DNA变性，两条链解开，然后使引物与模板退火，二者碱基配对，DNA聚合酶随即以四种dNTP为底物，在引物的引导下合成与模板互补的DNA新链。进行PCR扩增，应对目的基因片段两侧的序列了解清楚，至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。2．在DNA分离过程中，为何常常酚∶氯仿联用？3.酚与水有一定程度的互溶，单独用酚抽提DNA不能完全除去酚，而残留的酚抑制限制性内切酶和连接酶活性，甚至导致酶变性，而氯仿也是蛋白变性剂，它不与水互溶，而与苯酚互溶，故可带去残留酚。4.用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样信息？引物设计

5、的一般原则有哪些？进行PCR扩增，应对目的基因片段两侧的序列了解清楚，至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。引物设计的一般原则：a.长度15～30bp，Tm接近72℃。b.G+C占50%～60%，避免单一碱基的连续排列，一般两端G+C含量近似。c.引物3’端必须与模板DNA互补。d.一对引物间不能有4个以上的碱基互补。e.引物本身应避免有回文序列。5.为什么氧化变色的酚不能直接用于DNA的分离？应如何处置？苯酚呈酸性，易氧化产生自由基，直接用于DNA的分离，能够引起磷酸二脂键断裂，造成DNA降解，故氧化的酚需经重蒸除去氧化物，然

6、后用Tris-Hcl饱和，调pH至中性使用。饱和酚可防止酚吸收更多DNA溶液，以降低DNA损失率。6.分离DNA时，为什么要在缓冲液中加入一定浓度的EDTA和蔗糖？（1）EDTA是螯合剂，可同Mg2+离子螯合，使核酸酶失去了作用的辅助因子，而抑制核酸酶的活性；（2）蔗糖可增加缓冲液的黏度，保护DNA不易断裂。7.抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度大，因而与水相

7、分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂的比重更大，保留在最下层。作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10%～15%的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中的DNA，且单独用酚抽提DNA不能完全除去酚，而残留的酚抑制限制性内切酶和连接酶活性，甚至导致酶变性，而氯仿也是蛋白变性剂，变性作用虽不如酚效果好，但它不与水互溶，不会带走DNA，而与苯酚互溶，故可带去残留酚。所以在抽体过程中，混合使用酚与氯仿效果最好。8.为什么用酚与氯仿抽提DNA时

8、，还要加少量的异戊醇？在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈震荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异