半定量液基细胞学制片操作指南 唐博士

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1、半定量液基细胞学制片操作指南1．处理载玻片制片前，将载玻片预先排放于玻片处理架上，放入配制好的粘片剂中，浸泡至少10分钟。取出玻片架搁在玻片处理盒上，沥干粘片剂后放置在滤纸上晾干玻片，用载玻片盒存放处理过的玻片备用。（载玻片应至少提前2-3小时处理完毕）。粘片剂稀释方法：2ml粘片剂原液加220ml蒸馏水稀释于玻片处理盒，可处理400-800张载玻片。稀释后的粘片剂使用不超过1周。2．标本确认及编号取待检标本瓶和申请单，核查是否为该检查项目标本，核对对贴号，在相同对贴号的标本瓶和申请单上用记号笔标

2、上同一流水号。每例标本准备1支离心管（10ml左右）和2支圆底试管（5ml左右，一支用于DNA制片，另一支用于TBS制片），摆放在试管架上。离心管用记号笔标上编号，此编号与标本瓶编号应一致，圆底试管上可分别标上“D”（用于DNA制片）和“T”（用于TBS制片）。3．排列玻片用试管架的底面将编好号的玻片依次沿水平滴片板上的白色平行线排列整齐，平行线下方的一条用于对齐玻片的底边缘，上方的一条用于指示滴片的位置（如果暂时没有滴片板，则在干净水平的桌面上用铅笔画两条相距3cm的平行线代替）。4．添加细胞分

3、散剂分别向每个圆底试管中加入100μl的细胞悬浮液。5．转移标本、离心将标本瓶放在涡旋式混匀器上振荡3-5秒，缓缓向离心管中倒入6ml左右的标本。离心管经平衡后放入离心机，离心速度设置为1500转/分钟，时间设置为5分钟，开始离心。6．倒上清离心完成后，逐个将离心管中的上清液倒出，并在滤纸上尽量吸尽管内的残余液体，此时可观察到离心管底部有沉淀的细胞团块。注：如果发现细胞沉淀过少且较为松散，为防止细胞被倒出，最好用滴管从上部将管中的上清液吸出。7．稀释细胞沉淀针对每个标本，观察其离心管中细胞沉淀多少

4、，并将其与示意图（见附件）上的模拟标本体积逐个进行对比，确定所需的稀释体积，原则上稀释体积为细胞沉淀体积的2.5倍-3倍。根据确定的稀释体积，用可调式移液器向相应的离心管中加入定量的蒸馏水，如果没有可调式移液器，也可以直接用定量移液器或滴管向离心管中逐滴加水至示意图中黑线标识的位置。8．转移细胞稀释液所有离心管中的标本经稀释后，先将第一个标本的离心管放在涡旋式混匀器上振荡3-5秒，用滴管吸取适量细胞稀释液，向用于DNA制片的圆底试管中加入2滴，向用于TBS制片的圆底试管中加入1滴。然后用同样的方法

5、转移下一个标本的细胞稀释液，直至所有标本都转移完成。9．滴片针对每个标本，同时将2个圆底试管（DNA和TBS各一个）于混匀器上再次振荡3-5秒，用滴管从用于DNA制片的试管中吸取适量的细胞悬液，于相应载玻片滴片指示线正上方约5cm处，垂直滴2滴细胞悬液至载玻片中心，完成DNA制片，将滴管内的剩余细胞悬液吹出至DNA制片的试管中；再用滴管从用于TBS制片的试管中吸取适量的细胞悬液，按同样的方式进行TBS制片。10．晾干同一组标本滴片全部完成后，将所有玻片缓缓平移至水平底板前端，进行下一组操作。玻片自

6、然晾干后即可进行染色。补充方案对于那些细胞偏少的标本，如果离心后细胞沉淀体积小于20μl，则将标本瓶中剩余标本全部倒入离心管再次合并离心。如果再次离心后细胞沉淀体积大于20μl，则采用上述正常方案制片。如果细胞沉淀体积仍然小于20μl，则采用以下方案制片：用滴管从圆底试管中吸取2-3适量细胞悬浮液滴细胞悬浮液，直接滴加2-3滴至尖底离心管中，振荡混匀，用滴管从离心管中吸取适量的细胞悬液，于相应载玻片滴片指示线正上方约5cm处垂直滴2滴至载玻片中心，完成DNA制片；再用滴管从圆底试管中吸取适量细胞悬

7、浮液，直接滴加1-2滴至离心管？？（另一支还是和DNA的同一支？里面有多少分散剂？）中，振荡混匀，用滴管从离心管中吸取适量的细胞悬液，于相应载玻片滴片指示线正上方约5cm处垂直滴2滴至载玻片中心，完成TBS制片。