高效液相常见问题

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1、摘自《丁香园》请问：我的柱压为什么一直很高？每天做完后我用于5%的甲醇0.2ml/min冲过夜，第二天用甲醇冲30min后再进行工作。答：柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，我建议你可按下面步骤检查问题的起因。1、拆去保护柱（哪个是保护柱？），看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查。3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，(此时不

2、要连接检测器，以防固体颗粒进入检测器)。这时，如果柱压仍不下降，再检查；4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与柱子厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。我看到你用5%的甲醇0.2ml/min冲过夜，虽然流速很低，但你的水相占比例大，对柱子的寿命不好，不知道你的是长柱还是短柱，柱压有多高？请告知！请问：做HPLC时，基线漂移厉害是怎么回事？做HPLC时，基线漂移的厉害是怎么回事？做HPL

3、C时，不进样，走梯度，0-20min,20%CH3OH-100%CH3OH,20-30min,100%CH3OH,用H20/CH3OH,或0.1%TFA/CH3OH,0.1%TFA体系，波长240nm,基线漂移的厉害，大概漂移有200MAU，是不是进样池污染了？答：1进气泡了,流动相脱气2如果是检测池污染了.在不接柱的情况下,先用水冲20min,然后用5%的硝酸冲洗30min,最后用水冲洗至中性.1.检测池可能有气泡2.检测池可能被污染3.检测池流动相未置换完全4.氘灯问题。5.色谱柱污染6.脉动7.温度影

4、响HPLC常见问题和对策—对实验人员十分有用 HPLC色谱常见问题1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不重现，为什么？6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？7.色谱双峰产生的可能及判断和处理8.色谱柱中的流动相会排干吗？9.使用PEEK

5、(polyetheretherketone)管路和接头需要注意什么问题？10.液相色谱梯度洗脱中柱温的影响有那些？11.为何基线会漂移12.规则的基线噪音是如何产生的13.不规则的基线噪音是如何产生的14.保留时间漂移的故障排除15.为何出现肩峰或分叉？16.为何出现鬼峰？17.为何出现峰拖尾？18.为何出现峰展宽？19.除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变？20.什么是强溶剂、弱溶剂？21.怎样才会使峰位发生重排？22.除了在线脱气常用的实验室脱气方式还有哪些？23.评价一个色谱柱的最基本指标有那些？2

6、4.什么是时间常数？25.为什么在实验过程中有时会出现倒峰？26.为何会出现“胖"峰和平头峰？怎样避免？27.什么是次级保留效应？28.前延峰的发生及处理？29.峰变宽的原因？30.柱平衡慢的常见原因有哪些？31.用内标法实验时对内标物的要求有哪些？32.管子切割与安装注意事项？33.什么是HPLC的“无限直径效应"？34.如何评价一台检测器？35.如何简单判断比例阀是否内漏？1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温

7、装置，保持柱温恒定②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子③可能柱超载，减少进样量。3.HPLC

8、灵敏度不够的主要原因及解决办法①样品量不足，解决办法为增加样品量②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器④检测器衰减太多。调整衰减即可。⑤检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数？⑥检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。⑦检测池中有气泡。解决办法为排气。⑧记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。⑨流动相流量不合适。调整流速即可。⑩检测器与记