生物样本前处理技术

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1、生物样本前处理技术【讨论】生物样本前处理技术样本前处理技术在分析方法中占有极其重要的地位，很多分析问题都可以通过样本前处理解决，本文将对样本前处理过程中遇到的问题和样本前处理方法进行综述，以期形成一个系统。本文将分为1.样本分类及采集2.初步处理3.游离药物分离4.萃取技术5.萃取后过程五个部分进行分别阐述。其中有不少为个人观点，希望各位战友能不吝指正（纠正错字，纠正观点，进行讨论都欢迎），希望和园内战友共同学习。------------------------------------------------------------

2、--------------------楼主快点介绍吧。--------------------------------------------------------------------------------1.1生物样本分类生物样本多种多样，有血浆、血清、全血、淋巴、唾液、各种组织、毛发、尿液、胆汁、泪液、脊髓液、汗液、乳汁、羊水、粪便以及呼出的气体。（以下文字主要摘自《体内药物分析》姚彤伟编著2001年）生物样品可大致分为①均匀样品：血液、尿液、唾液、胆汁、脑脊液、淋巴液、乳汁和性腺分泌液等体液；②非均匀样品：心、肝、脾

3、、肺、肾、胃、肠、生殖器官、脑、体脂、胸腺肾上腺和骨骼肌等11种器官、组织。RuthEndacott[1]总结了临床样本采集时需要注意的问题以使采样够用和适用。[1]:EndacottR,BottiM.Clinicalresearch3:sampleselection.IntensiveCritCareNurs.2005Feb;21(1):51-5.1.2生物样品采集1.2.1血样1.2.1.1组成血样包括血浆、血清和全血，其中最常用的是血浆。一般认为，药物在体内达到稳定状态时，血浆中药物浓度是与药物在作用点的浓度紧密相关的，即血浆

4、中药物浓度可以反映药物在体内(靶器官)的状况，而且血浆中药物浓度的数据报道较多，可供借鉴。欲借助血药浓度来了解药物体内的转运规律和用于剂量调整,应待药物在血液中分布均匀后再取样。直接抽取动脉血或自心脏取血无疑是最理想的方法，因为动脉血中的药物已充分混匀，但此法仅适用于动物实验研究。就采血方式而言，目前使用较多的方法是自静脉采血，并且视采血次数的多少和实验方法需要，一般每次采血1－5ml。做动物实验时，采血量不宜超过动物总血量的十分之一，以免因血流动力学改变而影响研究结果。表1列出常见动物的采血方法。标准的犬类或猫类动物收集血样方法参

5、见LucasRL的综述。血样储存及储存条件参见下表2。1.2.1.2血浆及血清血浆(plasma)的取得是在加肝素、草酸盐、枸橼酸等抗凝剂的全血经离心后分取上层清液，其量约为全血的一半。血清(serum)则是由血液中纤维蛋白原等影响下引起血块凝结而析出，离心后取上层清液而得，血块凝结时，往往易造成药物吸附的损失。通过制备后的血清一般可以得到全血的40%，而血浆会比血清多，大约占全血的50％，个体差异较大。血清和血浆有以下三点区别：1。血清中没有纤维蛋白原2。血清中无参与凝血机制的血浆蛋白3。血浆无一些凝血过程中血小板释放的物质。在药

6、代研究中两者各有优缺点：1。血浆中含有抗凝物质（肝素或EDTA），可能会干扰化合物的检测（结合等），血清则无。2。血浆中蛋白稍多，可能会在SPE中产生诸如堵柱子等情况，干扰样本制备过程（这一点其实差别不明显）。3。血浆制备快速，直接低温或常温离心后即可分离，血清制备耗时较长。这一点对药代试验影响较大，因为给药后4小时内一般取血点都较为密集。但血清分离胶的出现可解决这个问题，详见本文2.1.2节。4。血清的凝血过程可能会因为与药物产生吸附作用，从而减少血清的含量，并且有可能造成浓度不平行现象。血样采取量受到一定限制，尤其是连续取样时，

7、病人感到负担，不易得到配合。血样一般每次取1-5mL，但随着高灵敏度测定方法的建立，取样可少到0.1-0.3mL，可改用手指取血，从而易为受试者接受。1.2.1.3全血全血(wholeblood)也应加入抗凝剂混匀，防止凝血。对大多数药物来说，血浆浓度与红细胞中浓度成正比，全血不能提供更多数据，全血药物浓度往往不能很好反映药物的药理作用强度，不能作为作用部位药浓的可靠指标。常选用血浆或血清进行体内药物分析，其原因如下：1.血细胞中药物暂时仅作为药物“储库”而失去药理作用，不是反映作用部位药浓的改变，因而不能与药效建立相关关系。2.血

8、细胞密集现象。有一些药物如米帕林，它主要集中于白细胞内，只要有生理病理因素导致白细胞增加，就会引起全血药物浓度相应升高，其全血药物浓度变化仅反映白细胞数量的改变，而不是反映作用部位药浓的改变。有些药物(如氯噻酮)可与红细胞结合，其动力