朱砂、朱砂安神丸与氯化汞、轻粉的急性毒性对比研究

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1、朱砂、朱砂安神丸与氯化汞、轻粉的急性毒性对比研究何海洋1康峰1颜俊文2刘杰2时京珍1*(1.贵阳中医学院实验中心基础医学实验室,贵州贵阳550002;2.遵义医学院药理学教研室,贵州遵义563000)[摘要]目的：对比研究朱砂、朱砂安神丸与氯化汞、轻粉对小鼠的急性毒性。方法：小鼠一次给药后，分别检测肝肾组织中汞蓄积量，肝肾功能，观察肝、肾、等主要脏器的组织形态学变化，并运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)的方法检测药物对MT-1、MT-2基因表达的影响。结果：氯化汞组小鼠肝、肾组织中汞蓄积量远远高于朱砂组、朱砂安神丸组和轻粉组

2、；朱砂高剂量组、氯化汞组肝、肾组织中MT-1和MT-2mRNA表达高于其他各组；朱砂高剂量组和氯化汞组小鼠肝肾组织中出现病理损伤。结论：小鼠一次性给药后，临床常用量的朱砂和朱砂安神丸毒性要远远小于氯化汞。[关键词]朱砂朱砂安神丸氯化汞轻粉毒性朱砂为硫化物类辰砂族矿石，又名丹砂，辰砂。入药始载于《神农本草经》至今已有2000多年历史。其具有清心镇惊，安神解毒的功效[1]。朱砂主要成分为HgS，另外还含有少量的游离汞和可溶性汞盐。轻粉（Hg2Cl2），又名甘汞，也是一种含汞的矿物药。由于朱砂和轻粉都含汞等重金属离子,自古以来就被认为

3、是一种有毒之品,在国外甚至限制其使用,质疑甚至反对朱砂和轻粉入药者颇有人在,大大影响了其在临床上的应用。朱砂安神丸是临床上常用的安神中成药，但其汞含量超欧洲药典标准10万倍[3]，究竟朱砂安神丸有多毒？朱砂毒性能否与其他含汞化合物如氯化汞（HgCl2）相提并论？本文通过对HgCl2、轻粉、朱砂及朱砂安神丸的急性毒性对比研究，来探讨朱砂及其复方（朱砂安神丸）的毒性。1材料1.1动物清洁级昆明种小鼠，体重20－22g，雌雄各半，由重庆市第三军医大学提供，许可证号：SCXK（渝）2007001。1.2主要药品与试剂朱砂，购自贵州省万山

4、特区矿产公司；朱砂安神丸，购自哈药集团世一堂制药厂(批号：0806708)；氯化汞，轻粉，均购自美国Sigma公司，Trizol、逆转录试剂盒、PCR引物，均购自宝生物工程（大连）有限公司；PowerSYBR®GreenPCRMasterMix，购自美国ABI公司；RNA纯化试剂盒，购自上海华舜生物技术有限公司。1.3主要仪器F732-V型冷原子吸收测汞仪，上海华光仪器仪表厂；原子荧光光谱仪，北京科创海光仪器有限公司；实时荧光定量PCR（RT-PCR）仪，美国BIO-RAD公司；TU-1810紫外-可见分光光度计，北京普析通用仪

5、器有限责任公司；Eppendorf5417R台式高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司；多功能梯度PCR仪，德国Eppendorf公司。2方法2.1动物分组与给药方法将42只小鼠称重后随机分为7组，每组6只，雌雄各半：空白对照组，给予正常饮食；朱砂安神丸低剂量组，10g·kg-1（Hg质量分数0.9g·kg-1），ig。朱砂安神丸高剂量组，20g·kg-1（Hg质量分数1.8g·kg-1），ig。朱砂低剂量组，0.3g·kg-1（Hg质量分数0.26g·kg-1），ig。朱砂高剂量组，16g·kg-1（Hg质量分数13.3g

6、·kg-1），ig,HgCl2组，70mg·kg-1（Hg质量分数0.05g·kg-1），ig,轻粉组，61.2mg·kg-1（Hg质量分数0.05g·kg-1），ig,各组小鼠均早晨给药一次。8小时后断头处死，取血、肝脏和肾脏。2.2肝肾功能检测血液离心取血清，按照试剂盒说明书测定血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、尿素(UREA)和肌酐（CREA）。2.3病理学检测取小鼠肝脏的同一部位、同侧肾脏，10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下观察其组织病理变化。2.4肝肾组织中MT-1、MT-2基因表达的

7、检测按照试剂盒说明书提取并纯化RNA，并分别在260nm和280nm处测其吸光度,计算出A260/A280的值。然后应用PCR仪进行逆转录，反应条件：25℃，10min；48℃，60min；95℃，5min；4℃后适当时候取出。反应结束后,加DEPC水，1：1稀释。PCR扩增：PCR总反应体系为15μl,其中包括：cDNA3μl，SYBR®GREENPCRMaster　Mix7.5μl,DEPC水4μl，混合引物0.5μl，然后应用iCycleriQreal－timePCR仪进行扩增，扩增条件：，95℃，10min；95℃,15

8、s；60℃,60s。40个循环。引物由宝生物工程有限公司设计并合成，MT-1同义链：5＇-AATGTGCCCAGGGCTGTGT-3＇反义链：5＇-GCTGGGTTGGTCCGATACTATT-3＇；MT-2同义链：5＇-TGTGCCTCCGATGGATCCT-