药品生物检定技术

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1、第八章药品生物检定技术简介药品生物检定技术是指利用生物体（微生物、细胞、离体组织或动物）对药物的特定药理、毒理作用，来测定生物药品的效价、检查药品中的有害物质以及对制剂进行微生物限度或无菌检查的技术方法无菌检查微生物限度检查抗生素效价的微生物检定法生化药物效价的生物测定法药品的安全性检查第一节无菌检查概述无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。将药品或材料，在严格的无菌操作条件下，接种于适合各种微生物生长的不同培养基中，置于不同的适宜温度下培养一定的时间，逐日观

2、察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性对照试验的结果，判断供试品是否无菌。包括薄膜过滤法和直接接种法两种方法一、常规技术要求1.应在环境洁净度10000级以下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行检查。2.全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。3.单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。二、培养基（一）培养基的种类：7种硫乙醇酸盐流体培养基（需氧菌、厌氧菌培养基）改良马丁培养基（真菌培养基）选择性培养基0.5%

3、葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）营养肉汤培养基营养琼脂培养基改良马丁琼脂培养基二、培养基（二）培养基的适用性检查证明：培养基无菌，且能保证细菌生长良好1.无菌性检查无菌性检查每批培养基随机取不少于5支（瓶），培养14天，应无菌生长二、培养基（二）培养基的适用性检查2.灵敏度检查灵敏度检查方法：取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养

4、基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。结果判断：空白对照管无菌生长，加菌培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定二、培养基（二）培养基的适用性检查适用性检查的菌种：金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌生孢梭菌、白色念珠菌黑曲霉图片取自青岛海博生物技术有限公司三、方法验证试验建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查排除供试品是否具有抑细菌和抑真菌作用避免假阴性结果方法：薄膜过滤法、直接接种法

5、四、无菌检查法（一）检验数量及检验量《中国药典》现行版附录批出厂产品最小检验数量表液体制剂最小检验量及上市抽验样品的最少检验数量表固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量表四、无菌检查法（二）对照试验1.阳性对照必须长菌，用以证明微生物确实可在应用的试验条件下生长根据供试品特性选择阳性对照菌无抑菌作用和抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌抗革兰阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌为对照菌抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌阳性对照管培养48～72小时应生长良好

6、四、无菌检查法（二）对照试验2.阴性对照不得长菌，用以检查试验过程中使用的溶剂、稀释液、冲洗液等对微生物生长及存活无影响四、无菌检查法（三）检查方法1.薄膜过滤法通过滤膜过滤，将供试品中可能存在的微生物富集于滤膜上，再冲洗掉滤膜上的抑菌成分后，在薄膜过滤器滤筒内加入培养基，在所需温度下培养，观察是否有菌生长四、无菌检查法（三）检查方法2.直接接种法3.培养及观察将含培养基的容器在规定的温度培养14天，逐日观察并记录是否有菌生长。必要时可转种及涂片五、无菌检查结果判断（三）检查方法1.阳性对照管应生长良好，阴性对

7、照管不得有菌生长。否则，试验无效。2.若供试品管显澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。3.若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。4.试验若经确认无效，需依法重试。第二节微生物限度检查微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受到微生物污染程度的方法，检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。微生物限度检查成为非规定灭菌制剂保证药品质量的重要检查内容，也是综合评价药品生产各环节卫生状况的一个依据。一、常

8、规技术要求及检验量（一）技术要求1.检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。2.单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。4.细菌培养温