双歧杆菌上清液对d半乳糖的抗衰老作用

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1、双歧杆菌上清液对D半乳糖的抗衰老作用【摘要】目的通过观察双歧杆菌上清液(SCS)对D半乳糖所致亚急性衰老小鼠血脂和学习记忆行为的影响，探讨SCS降低血脂的机制，为进一步研究SCS中有效延缓衰老的成分提供理论依据。方法小鼠颈背部皮下注射D半乳糖和生理盐水建立亚急性衰老模型和正常对照。同时，对实验组小鼠腹腔注射SCS，连续培养42d后称重，检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDLC)含量。结果与模型组相比，实验组小鼠血清TG、TC水平显著降低(P<0.05)，血清HDLC水平明显提高，学习记忆能力较模型组明显提高。结论SCS能降低血清TG、T

2、C含量，延缓D半乳糖小鼠的衰老进程。【关键词】双歧杆菌上清液;D半乳糖;衰老;血脂;学习记忆双歧杆菌上清液(spentculturesupernatant,SCS)主要由双歧杆菌代谢产物组成，包括其代谢产生的有机酸、细菌素以及细胞本身的结构物质，主要成分为蛋白质和多糖。周正任等〔1〕通过有机溶剂沉淀法收集菌体外多糖(EPS)，并在体外与小肠上皮细胞内的淋巴细胞(iIEL)共同孵育，发现其对iIEL具有免疫激活作用。许多学者也曾提出SCS中存在着细菌素、黏附素等活性成分〔2～4〕，具有免疫调节、杀菌、抗衰老等多种生物作用。本研究通过观察SCS对D半乳糖所致亚急性衰老小鼠血脂的

3、影响，探讨SCS降低血脂的机制。7　　1材料与方法　　1.1动物雄性昆明株小鼠，鼠龄3个月，体重(20±2)g，由南阳医专实验动物中心提供。　　1.2主要试剂BL培养基，酶法血清高密度脂蛋白(HDLC)试剂盒由上海求精生化试剂仪器有限公司生产。酶法血清总胆固醇(TC)试剂盒和酶法血清甘油三酯(TG)试剂盒由上海生化制药厂生产。D半乳糖购于上海恒信制药厂,批号:20010218。青春双歧杆菌由南阳医专实验中心提供。　　1.3仪器及设备751型紫外分光光度计，山东高密分析仪器厂;XHF21高速分离器，北京医用离心机厂;XW280A旋涡混合器，上海医科大学仪器厂;电子分析天平，上海

4、精密科学仪器厂;电动玻璃匀浆机，宁波新芝生物科技股份有限公司。　　1.4方法　　1.4.1SCS的制备双歧杆菌在BL液体培养基中培养72h后，4000r/min离心10min,用NaOH调pH值为7.2，得SCS。4℃保存,用时复温至37℃。7　　1.4.2实验分组及动物模型制备随机将小鼠分为3组,每组10只。模型对照组：每日1次定时颈背部皮下注射D半乳糖0.15mg/g体重。正常对照组：每日1次定时颈背部皮下注射无菌生理盐水0.15mg/g体重。以上两组同时腹腔注射无菌生理盐水0.3ml。SCS组：每日1次定时颈背部皮下注射D半乳糖0.15mg/g体重，同时腹腔注射SCS0

5、.3ml。　　1.4.3观测指标及检测方法　　1.4.3.1动物一般情况实验开始后密切观察各组动物的体毛、活动、进食等情况，并定时测其体重变化。　　1.4.3.2小鼠血清TC、TG和HDLC的测定于第42天断颈处死小鼠，采血2ml，酶法测定血清TC、TG、HDLC。具体方法按照试剂盒说明书进行。　　1.5统计学分析计量数据用x±s表示,采用方差分析。　　2结果　　2.1实验动物生长情况7实验过程中各组动物均体毛光亮，活动、饮食进水正常，未出现异常死亡。各组动物体重随时间推移逐渐增加，至第6周实验结束时模型对照组体重较其余2组均低，有显著性差异(P<0.05)，3组体重顺

6、序为正常对照组>SCS组>模型对照组，其中，SCS组和正常对照组之间体重差异不显著(P>0.05)。见表1。表1各组小鼠实验过程中体重变化情况与模型对照组比较：1)P<0.05，下表同　　2.2双歧杆菌SCS对小鼠血脂指标的影响模型对照组小鼠TG、TC水平显著高于正常对照组(P<0.05)，SCS组小鼠TG、TC水平显著低于模型对照组(P<0.05)，HDLC水平显著高于模型对照组(P<0.05)。见表2。表2双歧杆菌SCS对小鼠血脂指标的影响　　3讨论　　根据Maillard提出的非酶促糖基化衰老学说,动物体内注射D半乳糖引起机体糖

7、代谢障碍,在代谢过程中产生的高级糖基终末产物(AGE)可直接损伤细胞，此外，AGE还可以引起微循环障碍和缺血改变,从而进一步加重衰老进程〔5〕。糖代谢障碍及AGE的损害作用又可以引起脂类代谢的紊乱。本实验表明，D半乳糖衰老小鼠血清TC和TG的含量较正常小鼠明显升高(P<0.05),而HDLC的含量则明显下降(P<0.05)，这与人体自然衰老时血脂的变化是一致的〔6〕。　　TC、TG水平升高、HDL7C水平下降可使动脉管壁增厚,不仅可以导致心血管疾病的发生，还可以