几种皮肤美白剂功效的比较

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1、几种皮肤美白剂功效的比较作者：杨龙海尹鸿萍薄并宏【关键词】酪氨酸酶抑制率　　【摘要】目的通过综合比较各种美白剂对胞内、胞外酪氨酸酶活性的抑制率以及对细胞毒性的大小，筛选出最佳美白剂。同时利用方法学研究，建立一套简便、有效的皮肤美白剂筛选方案。方法利用酪氨酸酶催化底物L-DOPA生成黑色素，通过吸光度法测定比较几种美白剂在胞内、胞外对酪氨酸酶活性的抑制率，利用MTT法测定美白剂对细胞毒性的大小，绘制出各种美白剂浓度与其酪氨酸酶抑制率关系曲线，得到各美白剂的ICmax及IC50，通过比较其大小，来确定各美白剂效果的优劣。结果胞外酪氨酸酶活抑制实验表明:美白剂对酪氨酸酶最

2、高抑制率大小为:熊果苷>Vc针剂>曲酸>氢醌>Vc-Na，最大抑制浓度排序为:Vc-Na>熊果苷>曲酸=氢醌>Vc针剂，半数抑制浓度排序为:Vc-Na>熊果苷>氢醌>曲酸>Vc针剂;胞内酪氨酸酶活抑制实验表明:各美白剂在胞内对酪氨酸酶半数抑制率浓度大小为:Vc-Na>熊果苷>曲酸>Vc针剂。结论熊果苷美白效果较好，细胞毒性相对小，性质稳定，是目前应用最为广泛的美白剂。8　　皮肤美白剂是通过作用于皮肤黑素的形成、代谢途径的某个阶段，能够显著控制、抑制黑素生成且符合安全要求的物质。皮肤黑

3、素生成的过程主要在黑素细胞的特征性细胞器―――黑素小体内进行的，体内的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下转化为多巴、多巴醌、多巴色素、5，6-二羟吲哚、吲哚-5，6-醌等［1］，最终转变为色素颗粒，其反应过程如下所示。在酪氨酸反应生成黑素的过程中，酪氨酸酶的催化作用主要发生在酪氨酸转化成多巴和多巴转化为多巴醌这两个反应中。因此，一大类美白剂的作用是通过抑制酪氨酸酶活性，阻断从酪氨酸生成黑色素的氧化反应［2］，从而减少黑素的生成，达到美白的效果，如熊果苷。有些不仅能阻断黑素生成过程中的酪氨酸酶活性，而且对已生成的黑素具有还原能力，从而达到双重美白效果，如Vc类美白剂。因此，我们

4、此次实验对这两种典型美白剂做了重点研究。评价一种皮肤美白剂的优劣，不仅要看其美白效果，还要视其对细胞毒性的大小［3］。近年来，国内外开发研制了多种皮肤美白剂，而对其进行筛选的方法却很少报道。我们此次设置了胞外酪氨酸酶活抑制实验，来测定美白剂抑制酶活的能力［4，5］;B16黑素细胞瘤的基本结构，特别是黑素合成功能与正常的人皮肤黑素细胞基本一致［6］，所以设置了B16胞内酪氨酸酶活抑制实验，模拟美白剂抑制人细胞内酪氨酸酶活的能力;另外加设了MTT实验，以测定美白剂对细胞生长的抑制作用。8本实验在筛选皮肤美白剂的同时，建立了一套完整、简便的皮肤美白剂筛选方案体系，为今后常

5、规大量分析提供可能。　　1实验1.1胞外酪氨酸酶活抑制实验1.1.1主要仪器、试剂及药品721分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）;电子分析天平;恒温水浴锅。L-多巴（sigma公司）;酪氨酸酶（sigma公司25000U）;pH6.8磷酸缓冲液;小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）。美白剂:熊果苷、Vc-Na、曲酸、氢醌（以上由辛普提供），Vc针剂（江苏宜兴前进制药厂）。1.1.2实验方法按表1准确吸取1，2，3，4组酪氨酸酶溶液，美白剂溶液，缓冲液于试管，混匀，28℃预热10min，加入L-多巴酪氨酸酶溶液，28℃准确反应5min，迅速转移至比色皿中，于

6、475nm处测吸光度值（A），每组平行实验2次。按下式计算对酪氨酸酶抑制率。抑制率=［1-（A3-A4）/（A1-A2）］×100%式中:A1，A2，A3，A4分别代为表1中1，2，3，4号反应液于28℃，5min时，475nm处的吸光度。　　表1反应液组成（略）8　　对于上述各美白剂样品，每种美白剂均测定其不同浓度下的抑制率，从而得到浓度-抑制率关系曲线。从该曲线求出ICmax及IC50。1.2胞内酪氨酸酶活抑制实验1.2.1主要仪器、试剂及药品恒温CO2培养箱（上海申兴公司）;电子分析天平;96孔平底培养板;酶联免疫标志仪;血球计数板;倒置显微镜（上海照相机三厂

7、）;胰酶（sigˉma公司）;培养液pH6.8磷酸缓冲液;L-多巴（sigma公司）;小鼠黑色素瘤细胞（B16）美白剂:熊果苷，Vc-Na，曲酸（以上由辛普提供），Vc针剂（江苏宜兴前进制药厂）。1.2.2主要试剂的配制胰酶:在100mlpH6.8的磷酸缓冲液中加入0.02gEDTA（EDTA溶液性不好，故先加入，如不溶，可加热至37℃），全溶后加入0.25g，溶解后小滤器过滤至血清瓶4℃保存。1640培养液:1640培养基1包、链霉素100mg、青霉素60mg、NaHCO32.0g溶于1000ml纯净水中，大滤器过滤，4℃保存细胞培养液:90ml1640培养液