《环境工程微生物》实验指导书-专科(1)

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1、湖北理工学院《环境工程微生物》实验指导书环境科学与工程学院2012-03-10实验一微生物光学显微镜的操作及菌体个体形态的观察一、目的1.掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。2.观察细菌、放线菌和蓝细菌的个体形态，学会生物图的绘制。二、显微镜的操作方法1．低倍镜的操作（1）置显微镜于固定的桌上。窗外不宜有障碍视线之物。（2）旋动转换器，将低倍镜移到镜筒正下方，和镜筒对直。（3）转动反光镜向着光源处，同时用眼对准目镜（选用适当放大倍数的目镜）仔细观察，使视野亮度均匀。（4）将标本片放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔的正中央。（5）将粗调节器向下旋转（或载物台

2、向上旋转），眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰。当物镜的尖端距载玻片约0.5cm处时停止旋转。（6）左眼向目镜里观察，将粗调节器向上旋转，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细调节器调节，至目的物清晰为止。（7）如果粗调节器旋得太快，使超过焦点，必须从第（5）步重调，不应正视目镜情况下调粗调节器，以防没把握的旋转使物镜与载玻片相碰撞坏。（8）观察时两眼同时睁开（双眼不感疲劳）。单筒显微镜应习惯用左眼观察，以便于绘图。2．高倍镜的操作（1）使用高倍镜前，先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至视野正中处。（2）旋动转换器换高倍镜，如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，说明原来低倍镜就没有调

3、准焦距，目的物并没有找到，要用低倍镜重调。如果调对了，换高倍镜时基本可以看到目的物。若有点模糊，用细调节器调就清晰可见。3．油镜的操作（1）如果用高倍镜目的物末能看清，可用油镜。先用低倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。（2）在载玻片上滴一滴香柏油（或液体石蜡），将油镜移至正中使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。用细调节器微微向上调（切记不用粗调节器）即可。（3）油镜观察完毕，用擦镜纸将镜头上的油揩净，另用擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。三、细菌、放线菌及蓝细菌的个体形态观察（一）仪器和材料1．显微镜、擦镜纸、香柏油、二甲苯。2．示范片：细菌、放线菌、霉菌

4、、酵母菌、草履虫等。3.自然水体的原生动物和藻类活体。（二）实验内容和操作方法1．严格按光学显微镜的操作方法，依低倍、高倍及油镜的次序逐个观察各种微生物示范片。2．同法观察自然水体的原生动物和藻类。四、实验结果绘出你所观察到的几种微生物形态图。五、思考题1．为什么要先用低倍物镜观察，而不直接用和高倍镜或油镜观察？实验二培养基的制备配制和灭菌本次实验为实验三微生物纯种分离培养作准备，实验内容主要包括玻璃器皿的洗涤、包装，培养基的制备及灭菌技术等。一、目的（一）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。（二）掌握培养基和无菌水的制备方法。（三）掌握高压蒸气灭菌技术。二、仪器和材料（一）

5、培养皿（直径90mm）10套，试管（18mm×180mm）9支、移液管（10mL）1支、（1mL）2支，锥形瓶（250mL）2个，锥形瓶（500mL）1个，烧杯（500mL）1个，100mL量筒1个。（二）纱布、棉花、牛皮纸（或报纸）（三）精密pH试纸6.4～8.4、10%NaOH（四）牛肉膏、蛋白胨、琼脂、马铃薯、葡萄糖、蒸馏水（五）电炉、高压蒸气灭菌锅、烘箱、酒精灯（六）其他物品：记号笔、称量纸、试管架、纱布、棉花、棉线、报纸（或牛皮纸）三、实验内容（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．洗涤玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。培养皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自来水冲净。移

6、液管先用洗液浸泡，再用水冲洗干净。洗刷干净的玻璃器皿自然晾干或放入烘箱中烘干、备用。2．包装（l）移液管的吸端用细铁丝将少许棉花塞入构成l～1.5cm长的棉塞（以防细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹入管内）。棉塞要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉花滑入管内。将塞好棉花的移液管的尖端，放在4～5cm宽的长纸条的一端，移液管与纸条约成30○夹角，折叠包装纸包住移液管的尖端（实验图一8A），用左手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下纸头折叠打结。按实验需要，可单支包装或多支包装，待灭菌。（2）用棉塞将试管管口和锥形瓶瓶口部塞住棉塞的制作：按试管口或锥形

7、瓶口大小估计用棉量，将棉花铺成中心厚，周围逐渐变薄的圆形，对折后卷成卷，一手握粗端，将细端塞入试管或锥形瓶的口内，棉塞不宜过松或过紧，用手提棉塞，以管、瓶不掉下为准。棉塞四周应紧贴管壁和瓶壁，不能有皱折，以防空气微生物沿棉塞皱折侵入。棉塞插入2/3，其余留在管口（或瓶口）外，便于拔塞。试管、锥形瓶塞好棉塞后，用牛皮纸包并用细绳或橡皮筋捆扎好（实验图一8B）放在铁丝或铜丝篓内待灭菌。（3）培养皿由一底一盖组成一套，用牛皮纸或报纸将10套培养皿（皿底朝里，皿盖朝外，5套、5套相对）包好。（4）稀