cf系列免疫荧光染料选择方案

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1、常用抗体标记荧光染料的选择随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM,USA);AlexaFluor®系列(Lifetechnology,USA);DyLight系列;Cy系列;IRDye系列等等。使用最多的为AlexaFluor®系列和CFTM系列。CFTM系列染料的核心对比AlexaFluor®系列具有以下几点优势：1.新型罗丹明核心罗丹明染料以优异的耐光性和良好的荧光量子产量著称。因此很多AlexaFluor®染料具有罗丹明核心结构

2、，但是，传统罗丹明的化学结构很难从长波长的荧光染料延伸至远红外区域甚至是更具挑战性的近红外区域，而且生物偶联后其水溶性并不理想。Biotium科学家发现从绿色到近红外多色荧光的罗丹明染料的新型化学方法。该方法被有效的应用于CF染料的产品中，尤其是远红外CF染料，而且通过这种方法制备的染料不仅水溶性极佳而且耐光性极好。如：(下图)图3.CF系列染料的稳定性，图示为CF633在5min中仍然具有稳定的荧光强度；而AF647Dye在1min左右已经淬灭。1.特异性高的近红外染料近红外染料最大的特点是比可见光范围要大很多，大滴的染料常会导致染料水溶性低、染料

3、聚合体多、荧光量子产量差等问题。为了解决这些问题，许多商用的近红外染料比如AlexaFluor®、DyLight®dyes和IRDyes®近红外染料，在制备时吸附了大量的带负电荷的磺化基团，其磺化作用可以在一定程度上会提高染料的溶解性和荧光性，但这样也带来了另一些更加严重的问题，经这种染料标记的生物耦联物的非特异性结合。例如：与大量负电荷结合后可以显著的改变抗体的等电点，进而影响抗原抗体的特异性结合反应。综合以上内容，Biotium的科学家用革命性的方法设计出近红外染料CF，在避免引入大量负电荷的情况下，极大的保证了染料优异的理化特性。Biotium

4、近红外的CF染料以花青或罗丹明染料为核心结构，该核心结构的特殊化学修饰限制了染料的分子内位移，从而获得染料的高量子产率和更好的水溶性。因此，近红外CF染料比其他近红外染料荧光强度更高，光稳定性好。最重要的是，在免疫印迹实验上应用近红外CF染料标记蛋白质样品相对于其他商业用近红外染料制备的抗体偶联物，最大限度的提高了信噪比。(见下图)图2.AF染料(左图)结构中含有大量的磺化基团SO3-来增加染料的水溶性，但大量磺化基团的引入会使染料带大量负电荷，在标记蛋白和抗体时，容易非特异性吸附带正电荷的蛋白和抗体基团。而CF系列染料(右图)是经过新型改造过的染料

5、，不会存在上述情况，而且染料的水溶性极好。图4.CF染料的超强特异性；由于AF染料制备过程中含有大量带负电的磺化基团，容易非特异性结合正电基团，请看AF790Dye与CF790的条带特异性对比。1.优异的标记效率生物偶联后的活性染料一般很容易水解，会在运输，操作及储存中带来诸多不便，最终致染料结合效率低下。像AlexaFluor®dyes,DyLight™dyesandIRDyes®等严重的磺化作用有较强的吸湿性，恶化水解作用等问题。例如：AlexaFluor®488在应用时琥珀酰亚胺脂酯SE活性部分远低于50%（AlexaFluor488微量标记试

6、剂盒产品信息，Invitrogen）。相反，所有Biotium的CF染料具有相对稳定的胺活性的SE基团型，这比大部分AlexaFluor染料的SE更耐水解。总体来说，CF染料SE产品一贯的给出更高的标记效率，提供给用户更好的使用价值。选择方案：蓝色（350-450nm处激发）ØCF350、AlexaFluor350、AMCA等----亮蓝和紫外光激发CF350是类似于AlexaFluor350和传统荧光染料AMCA的蓝色荧光染料，CF350的荧光强度高于AlexaFluor350、AMCA,吸附在蛋白上的荧光超过50%,水溶性更好,耐光性非常优秀亮,

7、更容易与现有的绿色荧光基团区分。ØCF405S/CF405M、AlexaFluor405----近乎完美的匹配蓝色二极管激光器　　ØCF405S/CF405M、AlexaFluor405与近来使用的荧光显微镜和流式细胞仪405nm;谱线的蓝色二极管激光器完美的匹配。在流式细胞仪上的分析结果显示CF405S/CF405M荧光信号强度高于AlexaFluor405染料1.7倍。绿色（488nm处激发）ØCF488A、AlexaFluor488、FITC、FAM、DyLight488、Cy2等----针对488nm氩离子激光器的绿色荧光染料；以上染料其标记

8、的抗体蛋白适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；流式细胞仪的FL1通道检测；或者可用于荧光显微镜