HPLC法同时测定丹参类药材中水溶性活性成分的含量.doc

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1、HPLC法同时测定丹参类药材中水溶性活性成分的含量作者：杨树声,宋平顺，赵建邦，丁永辉【摘要】目的建立HPLC法同时测定丹参和甘肃丹参中丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B含量的方法，通过3种水溶性活性成分测定，评价野生和甘肃栽培丹参、野生和栽培甘肃丹参的质量。方法色谱柱为C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇—冰醋酸—水（20∶80∶1）；流速1.0mL/min。二元梯度洗脱。结果丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B分别在58～1455ng、15～162ng、825～8250ng范围内线性关系良好，回收率分别为102.20%

2、、101.53%和103.03%。结论方法简便、准确、分离效果好，可作为丹参水溶性活性3种成分的同时定量测定方法。【关键词】高效液相色谱法；丹参；甘肃丹参；水溶性成分；丹参素钠；原儿茶醛；丹酚酸B；栽培；野生丹参《中国药典》收载为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge的根[1]，甘肃分布于天水、陇南地区，仅有资源而无商品，近年，庆阳、平凉等地人工栽培成功。甘肃丹参来源于唇形科植物甘西鼠尾草SalviaprzewalskiiMaxim.或变种褐毛甘西鼠尾草Salviaprzewalskiivar.mandarinon

3、um(Diels)Stib.的干燥根及根茎，分布于甘肃、四川、云南等省区，为中药丹参的地方习用品，在甘肃药用历史较久，清代地方志已有收录[2]，亦在定西、平凉等地种植成功。甘肃人工栽培的丹参、甘肃丹参的质量研究评价未见报道，笔者建立了HPLC法同时测定丹参中丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B含量的方法，通过3种水溶性活性成分测定，评价野生和甘肃栽培丹参、野生和栽培甘肃丹参的质量，为今后甘肃发展人工资源和选择GAP适宜的基地提供依据。1仪器与试药1.1仪器美国Waters515型泵，Waters717自动进样器，Waters2487型紫外检

4、测器。超声波清洗器KQ2500（昆山市超声仪器有限公司）。1.2试药丹参素钠（110855-200203）、原儿茶醛（810-20004）、丹酚酸B（111562-200504）由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定。甲醇为色谱纯；水为娃哈哈纯净水，其余试剂为分析纯。甘肃丹参实验材料为甘西鼠尾草SalviaprzewalskiiMaxim.4的根茎，野生品分别产于漳县、天水、华亭、临夏、渭源等县，栽培样品产于岷县、渭源县；丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge的根，栽培样品产于华亭县和市售1，野生品为市售2

5、；以上经作者严格鉴定。2方法与结果2.1色谱条件大连伊利特C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）。流动相为甲醇—冰醋酸—水（20∶80∶1），二元梯度洗脱，0～5min，甲醇10%；5～25min，甲醇10%～35%；25～45min，甲醇35%。流速1.0mL/min；检测波长280nm。进样量10μL。柱温45℃。理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于2000。2.2含量测定2.2.1对照品溶液的制备精密称取丹参素钠5.82mg、原儿茶醛3.67mg、丹酚酸B8.25mg对照品，分别置于10mL量瓶中，加甲醇定溶制成对照品储备

6、溶液。2.2.2供试品溶液的制备取样品（过3号筛）0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，精密加水50mL，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）40min，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。对照品溶液、供试品溶液的HPLC色谱图见图1、图2。图1对照品HPLC图1.丹参素钠2.原儿茶醛3.丹酚酸B图2供试品HPLC图2.2.3线性关系考察分别精密称取1mL丹参素钠、1mL原儿茶醛、1mL丹酚酸B对照品储备溶液，分别置于100mL、250mL和5mL棕色量瓶中，加甲醇稀释定容至刻度，摇匀。

7、分别选择1,5,10,15,25μL和1,3,5,7,11μL以及5,10,20,40,50μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以进样量（X）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，其线性方程分别为：X=1.8208×10-3Y-0.1124、ｒ=0.9999；X=1.9078×10-4Y-0.0171、ｒ=0.9991；X=1.0745×10-6Y-1.8053、ｒ=0.9998；结果分别在58～1455ng、15～162ng和825～8250ng范围内线性关系良好。2.2.4精密度试验4对同一批甘肃丹参样品（临夏）按“供试

8、品溶液制备”方法，精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，重复进样5次，结果峰面积RSD分别为1.85%、1.27%和1.01%。2.2.5稳定性试验对同一批甘肃丹参样品（临夏）按“供试品溶液制备”方法，分别于配后0，2，4，6