小鼠抗双链dna抗体dsdna酶联免疫分析

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1、上海信帆生物科技有限公司小鼠抗双链DNA抗体（dsDNA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书第一部分ELISA简介ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的简称。自上世纪70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复

2、合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。第二部分ELISA的样本实验准备在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-70℃冻存备用。标本应避免

3、反复冻融。液体类标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时

4、，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞：检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂，用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（200

5、0-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7.4上海信帆生物科技有限公司标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.1.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。第三部分ELISA试剂盒的检测目的和实验原理1.检测目的本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中抗双链DNA抗体（dsDNA）含量。2.实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠抗双链DNA抗体（dsDNA）水平。用纯化的小鼠抗双链DNA抗体（dsDNA）抗体包被微

6、孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗双链DNA抗体（dsDNA），再与HRP标记的抗双链DNA抗体（dsDNA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗双链DNA抗体（dsDNA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠抗双链DNA抗体（dsDNA）浓度。第四部分试剂盒组成试剂盒组成48T96T保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准

7、品（960ng/L）0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20倍)20ml×1瓶(30倍)20ml×1瓶2-8℃保存第五部分操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。480