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《珍稀中药材-连城铁皮石斛产业化开发关键技术研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、珍稀中药材-连城铁皮石斛产业化开发关键技术研究张志勇梁金平周美玲黄萍萍吴文明（福建省龙岩市农业科学研究所，福建龙岩364000）摘要为了龙岩市连城县野生铁皮石斛中药材资源的保护及开发利用，本文进行了人工杂交育种、种胚离体培养和快速繁殖、组培苗移栽等关键技术研究，摸索出了杂交育种技术，授粉结果率在83%以上。分别筛选出了最适宜的种子萌发培养基：1/2MS+蛋白胨2g·L-1，发芽率达到95%；原球茎增殖培养基：1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+15%马铃薯，增殖系数达到5.7；壮苗生根培养
2、基：1／2Ms+0．5mg·L-1NAA+15%香蕉，苗高7.2cm，根数5.6条。组培苗的移栽成活率可达90%以上。关键词：铁皮石斛，杂交，组培快繁，移栽铁皮石斛Dendrobiumofficinale又名黑节草，为兰科石斛属多年生常绿草本植物，是一种名贵药材，《道藏》中它被列为中华九大仙草之首。主要药用成分为石斛多糖，具有提高人体免疫功能、抗衰老、防治肿瘤和心血管疾病以及改善睡眠、防治白内障等疾患的功能。铁皮石斛种子极小,无胚乳,自然条件下需与某些真菌共生才能萌发,自然繁殖率极低,加上人为地过度采集和自然环境破坏，
3、目前我国野生铁皮石斛资源几乎绝灭，已被列为国家二级保护植物。龙岩市连城县冠豸山等地野生铁皮石斛资源也有悠久的历史，但每年采集量急剧下降，为了保护珍稀铁皮石斛野生资源及其今后的开发利用，应用现代生物组织培养技术，笔者开展人工杂交育种、种胚离体培养和快速繁殖、组培苗移栽等关键技术研究，为铁皮石斛产业化开发提供科学依据。1材料与方法1.1人工杂交育种铁皮石斛系雌雄合生蕊柱。用牙签挑去白色的药帽露出黄色的花粉粒,用牙签提取花粉粒，将牙签尖粘住的花粉粒轻轻接触母本雌蕊的凹陷处,以粘上花粉粒而不损坏合生蕊柱为原则。分别做了两组的试
4、验①自花与异花授粉；②授粉时的花成熟度（开花时间）不同的影响（见表1）。1.2种胚萌发11～12月是铁皮石斛蒴果成熟时期，当蒴果外表转浅黄绿色时，达到发育成熟而尚未开裂时采收。蒴果用75%酒精果实表面消毒30秒，无菌水冲洗3次,再用0.1%升汞消毒10分钟,无菌水漂洗3次,在无菌条件下,将处理过的果实切开一个口子,将种子分别撒播在4种培养基上（见表2），观察统计萌发率、萌发时间，生长势等。1.3原球茎增殖培养。在前人研究总结及本人预备试验的基础上，重点进行培养基添加天然有机营养物种类的研究，将种子诱导产生的原球茎分别接
5、种在6种培养基上（见表3），观察其增殖系数及生长状况。1.4壮苗生根培养当原球茎分化的幼苗2～3cm时，移人4种生根培养基中进行生根培养（见表4），60天后观测记载苗高、根系条数和根系长度。每种培养基接种100株幼苗，3次重复。1.5组培苗移栽移栽前先将瓶苗进行10天的炼苗，慢慢适应自然环境，选取肉质茎有3～4个节间、长有4～5片叶的苗进行移栽，用1000倍多菌灵浸泡整株小苗10分钟，捞出后沥干。用水苔作为移栽基质，移栽前期注意遮荫、保湿，并作好病虫害防治。1.6组培的培养条件上述培养基均加蔗糖3%、琼脂0.7%、pH
6、值5.8、培养温度25℃左右、光照12小时/天、光照强度1500～2000lx、培养室湿度70%。2试验结果2.1人工授粉育种经研究发现，铁皮石斛以异花授粉为主，自花授粉的成功率低25%，异花授粉成功率高达80%；授粉最好选择开花后2～5天的，因此时的花粉黏性高，雌蕊也有明显的分泌液，表明活力高，故授粉成功率也较高，而随着开花时间的推移，花的活力降低，授粉的成功率也降低。授粉成功后的2～3天花瓣萎缩，4～6天花柄开始变粗及颜色变为深绿色，10天后可看到果实的雏形。而授粉失败的花朵在3～5天内变黄及脱落。表1不同授粉方式
7、、时间对授粉结实率的影响授粉方式授粉数量（朵）蒴果数（个）成功率（%）自花授粉16425异花授粉151280开花后2～5天授粉121083开花后6～9天授粉115452.2种子萌发将经过处理后的种子接种到4种萌发培养基上,8～19天后种子变得鲜绿,可见胚长大,呈球形,30～45天,种子部分发育成原球茎,圆球形的原球茎上有尖尖突起的叶原基,从原球茎的颜色、大小上看,接种在4号培养基1/2MS+蛋白胨2g·L-1的原球茎颜色最浓绿，直径也最大、最健壮，发芽率达到95%，萌发时间最短，为第8天，因此4号培养基是最适宜的种子萌
8、发培养基，说明添加物蛋白胨对铁皮石斛种子萌发有较好的促进作用，这应该是蛋白胨起到弥补了铁皮石斛种子不含胚乳的作用。另外，2号1/2MS培养基比1号MS培养基培养效果好，说明无机盐浓度过高反而不利于种子发芽，会造成部分胚褐化而死亡。表2不同培养基对铁皮石斛种胚萌芽的影响培养基发芽率（%）萌发时间（天）健壮程度1、MS5619黄绿2、
