蛋白质提取的方法总汇

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1、蛋白质提取的方法总汇中国生命科学论坛Ⅰ、植物组织蛋白质提取方法（summer）1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！Ⅱ、三氯醋酸—丙

2、酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的

3、去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！6Ⅲ、组织：肠黏膜（newinbio）目的：WESTERNBLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：1.含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）2.倒转混匀，置室温10min3.离心：12000g，10min，4度，弃上清4.加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）5.振荡，置室温20min6.离心：7500g，5min，4度，弃上清7.重复

4、0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次8.沉淀中加入100％乙醇2ml9.充分振荡混匀，置室温20min10.离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀11.1％SDS溶解沉淀12.离心：10000g，10min，4度13.取上清-20度保存（或可直接用于WESTERNBLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2XBUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。Ⅳ、lysissolution:（yog）Proteinextractionbu

5、ffer(Camiolobuffer):100ml=(0.075MPotassiumAcetate)0.736g(0.3M)NaCl1.753g(0.1M)L-argininebasicsalt1.742g(0.01M)EDTA-HCl0.292g(0.25%)TritonX-100250.ulupto100mlwithdH20.pH7.4.Then0.2umfilter.1.Freezetissueinliquidnitrogen.2.RinseinPBSthenmince.63.Add1mlCamioloextractionbufferper100mgoftissue.4.H

6、omogenizefor1minuteat4'C.5.Spinat3,000.rpm/15minutes/4'C.6.Removesupernatantandsaveinanothertube.7.Ifnecessary,dializethesupernatantagainstPBSwith50mM/LTris-HClpH7.4.Ⅴ、植物材料：水稻苗，叶鞘，根（ynibcas）1、200毫克样品置于冰上磨碎2、加lysisbuffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清3、重复离心5minlysisbuffer：ureanp-40ampholine2-mepvp-40Ⅵ

7、、蛋白质样品制备（sigma）秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等（1986）的方法进行。100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5ml10%三氯乙酸（丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇），混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000r/min离心15min，弃上清，沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，（有必要再用80％丙酮(含10mMβ-巯基乙醇所得