β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定

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1、β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定一、实验目的1、学习从天然产物中提取有机化合物的方法。2、学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理，点样，展开和计算Rf值的方法。二．仪器和试剂仪器三角瓶（50ml）、分液漏斗（150ml）、蒸馏瓶（50ml）、普通蒸馏装置（或减压蒸馏装置）、漏斗、色谱柱、硅胶薄层板、量筒、烧杯、层析缸。试剂胡萝卜、丙酮、石油醚（bp30~60℃）、硅胶（层析用，200~300目）、无水硫酸钠、石油醚（bp60~90℃）、丙酮：石油醚（1：9）（V/V）。三．实验方案1、含类胡萝卜素石油醚溶液的制备将新鲜胡萝卜洗净、擦干,切去尾部，切碎。称取碎鲜胡萝卜【1】10g

2、于小研钵中,研碎。碎胡萝卜移至50mL三角烧瓶中，每次用丙酮10mL萃取2次，再用石油醚（bp30~60℃）萃取固体两次，每次10mL。把石油醚溶液加到丙酮液中。在分液漏斗中将混合液与50mL饱和氯化钠溶液【2】振荡，分去下层，用蒸馏水洗涤上层液两次，每次50mL，分去水，用无水硫酸钠干燥石油醚液（约1h）,把混合液倒入50mL圆底烧瓶中，热水浴加热蒸馏，除去溶剂，得固体。在制得的固体物加入3mL石油醚（bp60~90℃）拌硅胶1g，在通风橱内抽干，得黄色硅胶颗粒，待上柱。2、装柱和分离取20cm*1cm色谱柱一根，垂直装置，以50ml三角烧瓶作洗脱液的接受器。用镊子取少许脱脂棉【3

3、】放于干净的色谱柱底部，轻轻塞紧，再在脱脂绵上盖一层厚0.5cm的海石砂（或用一张比柱内径略小的滤纸代替），关闭活塞，向柱内倒入石油醚（bp60－90℃）至约为柱高的3／4处，打开活塞，控制流出速度为1滴/s。通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入层析硅胶。用洗耳球轻轻敲打柱身，使填装紧密。当装填到3/4时，再在上面加一层0.5cm厚的海石砂，操作时一直保持上述流速，注意不能使液面低于砂子的上层。当液面流至离海石砂面1cm时，立即从玻璃漏斗加入已制备好的含胡萝卜素的黄色硅胶，随后用0.5ml石油醚洗下管壁的硅胶，如此连续2—3次，直至洗净为止，然后在色谱柱上装上滴液漏斗，用石油醚（bp60－9

4、0℃）作洗脱剂进行洗脱，洗1滴/s。当有一黄色的谱带分出，待黄色组分绝大部分洗出时，把洗脱剂换成1：9丙酮一石油醚（bp60－90℃）混液作洗脱剂进行洗脱，控制流出速度如前（这混液洗脱剂有助于混合物中极性较大的组分移动），又可分出两个黄色组分。在45—90min内，柱中物料将全部洗脱出来。观察这些物料通过柱子的移动情况。在三角烧瓶中收集3份洗出液。用纸色谱、薄层色谱对各段洗出液进行色谱分析。3.薄层色谱法样品：柱色谱法中洗脱出的份样品液展开剂：1：9丙酮一石油醚溶液薄层板的制备：取3片载波体，洗净，晾干。在50ml烧杯中放置3g硅胶G，逐渐加入0.5%cmC水溶液8ml，调成均匀的糊

5、状，将此糊状物倾于上述洁净的载玻片圣桑，用手将带浆的载玻片在水平的桌面上做上下轻微的颤动，并不时转动方向，制成厚薄均匀，表面光洁的平整的薄层板，然后放在水平桌面上，在室温放置晾干后放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h，取出，稍冷后置干燥器中备用。点样：取出上述制好的薄层板，分别在距一端点1cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。用毛细管吸取少量样品液，在一块板的起点线上点第一个色带的样品液，根据柱色谱分离的色带，依次点样，如果样点颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样点挥干后进行。样点直径不超过2mm。展开：待样点干燥后，小心地放入已加入展开剂的250ml广口瓶中进行展开。

6、在瓶的内壁贴一张高5cm，环绕周长4/5的滤纸，下面浸入展开剂中，以使容器内被展开剂蒸气饱和。点样一端浸入展开剂0.5cm（样点不浸泡在展开剂中）。盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升离板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，晾干后，量出展开剂和样点移动的距离，计算Rf值。四、注意事项1，本实验采取的工艺不同于其他工艺，体现在原料粉碎时加入了稳定剂（5ml氨水和35ml乙醇）来防止β－胡萝卜素被氧化，由此可提高提取率。2、色谱柱填装紧密与否，对分离效果很有影响。若柱中留有气泡或各部分松紧不匀（更不能有断层或暗沟）时，会影响渗滤速度和显色的均匀。但如果填装时过分敲击，又会

7、因太紧密而流速太慢。3、加入砂子的目的是。在加料是不致把吸附剂冲起，影响分离效果。4、为了保持色谱柱的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶液或溶液中是必要的。否则当柱中溶液流干时。柱身干裂，影响渗滤和显色的均一性。5、若不用滴液漏斗，也可用每次倒入10ml洗脱剂的方法进行洗脱6、载玻片上涂层要均匀，既不应有纹路、带团粒，也不应有能看到玻璃的薄涂料点。7、点样用的毛细管必须专用，不得弄混。8、点样时，使毛细管液面刚好接触到薄层（滤纸）既可，均匀点样过重而使薄层破坏。