3类产品抑菌效力检查方法

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1、标题抑菌效力检查方法文件编号1页数8/81检查内容及步骤1.1菌种确认品名标准编号数量（支）菌种代数来源铜绿假单胞菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌黑曲霉确认人及日期：复核人及日期：1.2培养基确认品名批号用途来源胰酪胨大豆肉汤培养基胰酪胨大豆琼脂培养基接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌沙氏葡萄糖液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基接种白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂培养基黑曲霉确认人及日期：复核人及日期：6.3培养条件确认6.3.1本检查法中细菌、控制菌的培养温度为℃，真菌的培养温度为℃。6.3.2培养箱确认序号培养箱名称型号校验日期校验

2、周期校验单位1电热恒温培养箱HH.B11.500-S2生化培养箱LRH-150B确认人及日期：复核人及日期：6.4样品来源确认标题抑菌效力检查方法文件编号1页数8/8品名批号数量来源备注蛋白琥珀酸铁口服溶液确认人及日期：复核人及日期：6.5操作环境确认为的洁净区域以内，局部（操作台）为级并单向流空气。确认人及日期：复核人及日期：7培养基的适用性检查7.1抑菌剂效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。7.2菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第

3、0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）〔CMCC(B)10104〕大肠埃希菌（Escherichiacoli）〔CMCC(B)44102〕金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）〔CMCC(B)26003〕白色念珠菌（Candidaalbicans）〔CMCC(F)98001〕黑曲霉（Aspergillusniger）〔CMCC(F)98003〕7.3菌液制备7.3.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨

4、大豆肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养24～48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。标题抑菌效力检查方法文件编号1页数8/87.3.2菌液制备后若在

5、室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。7.3.3菌液浓度确认品名稀释倍数平皿计数结论皿1（cfu/ml）皿2（cfu/ml）平均值（cfu/ml）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌白色念珠菌黑曲霉7.4适用性检查取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌各50～100cfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平

6、皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。7.5结果判定若被检培养基上的菌落平均数不少于对照培养基上菌数平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。检测项菌种名称大肠埃希菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌白色念珠菌黑曲霉试验组菌数对照组菌数被检培养基占对照培养基的菌数比值标准被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上得菌落一致，判该培养

7、基的适用性检查符合规定。结论检查人：复核人：8抑菌效力检查方法确认8.1菌种：同培养基的适用性检查，若需要，制剂中常见的污染微生物也可作为试验菌株。标题抑菌效力检查方法文件编号1页数8/88.2菌悬液的制备8.2.1铜绿假单胞菌菌悬液：接种铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至，用比浊法制成每1ml含菌数约为108cfu。8.2.2金黄色葡萄球菌菌悬液：接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基，30～35℃培养18～24小时；取上述培养物用0

8、.9%无菌氯化钠溶液稀释至，用比浊法制成每1ml含菌数约为108cfu。8.2.3大肠埃希菌菌悬液：接种大肠埃希菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基，30～35℃培养18～24小时；取上述培养