植物l苯丙氨酸解氨酶（pal）酶联免疫分析（elisa）

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1、北京方程佰金科技有限公司经销ELISA试剂盒并提供ELISA实验代检测服务电话：010-57266903010-82833221邮箱：bio_fc@163.com网址：www.bio-function.com在线QQ：21570372865468944植物L苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中植物L苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物L苯丙氨酸解氨酶(PAL)水平。用纯化的植物L苯丙氨酸解氨

2、酶(PAL)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物L苯丙氨酸解氨酶(PAL)，再与HRP标记的L苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的L苯丙氨酸解氨酶(PAL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物L苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）

3、密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：540U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存标本要求：1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应

4、尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μ3北京方程佰金科技有限公司经销ELISA试剂盒并提供ELISA实验代检测服务电话：010-57266903010-82833221邮箱：bio_fc@163.com网址：www.bio-func

5、tion.com在线QQ：21570372865468944l分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μ

6、l，浓度分别为360U/L，240U/L，120U/L，60U/L，30U/L）。1.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。2.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。3.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。4.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去

7、，如此重复5次，拍干。5.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。6.温育：操作同3。7.洗涤：操作同5。8.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.9.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。10.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀

8、释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD