洋葱鳞茎和黄豆表皮细胞液泡系的活体染色

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1、洋葱鳞茎和黄豆表皮细胞液泡系的活体染色摘要：活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色，但又无毒害的一种染色方法。本文使用中性红染料对洋葱鳞茎细胞和黄豆表皮细胞进行了活体染色，均得到了较好的染色效果。关键词：活体染色；液泡系；染色技术；植物细胞Abstract：Vitalstainingisatechniquethatcandyethelivingorganiccellwithouttoxicity.Inthisexperimentthebeanepidermiscellsandonionbulbcellswereproceededvitalstai

2、ningbyneutralred，andwegoteligiblesamples．Keyword：Vitalstaining，Vacuome，Stainingtechnique，Plantcell前言早在1887年，荷兰植物生理学家P.feffer首先用次甲基蓝的稀释溶液对水棉和蓝藻及浮萍叶细胞的液泡进行活体染色。当时对他的实验没有引起重视。直到20世纪30年代前后，法国著名的植物学家季尔蒙（A.Guillermond）和唐萨尔（P.A.Dangeard）两个学派系统地、全面地进行活体染色剂的使用，利用活体染色技术来研究活的植物细胞内细胞质基本形态构

3、造的组成物。他们先后提出了“液泡系统”和“线粒体系统和质体系统”的学说。从1924年至1934年，法国的M.Parat又系统地、深入地利用活体染色技术，并与其他新技术结合，研究动物细胞的细胞质基本的形态结构、演进规律及其生理功能。Parat第一次在动物活细胞内发现了一个液泡系，提出了“液泡系和高尔基区学说”。苏联的拿索诺夫学派，后来还在Parat学说的基础上，应用中性红活体染色技术来研究细胞的“类坏死”现象和医学上的一些问题。自20世纪30年代以后，这种新技术才越来越显示它的重要性，成为实验细胞学的一种研究方法。过去在细胞学方面曾利用一些老的、简单又

4、方便的方法来研究细胞，就是活的观察方法。但是这种方法有很大的局限性，因为观察时间很短，不能显示细胞的详细构造。至于固定染色的切法，虽然能够显示出细胞内的详细构造，但往往引起细胞内发生“人工效应”而将某些本来存在的、重要的构造在固定的过程中被毁掉或变形。过去在相当长的时间，不知道活细胞内的两种重要的细胞器—线粒体系和液泡系—就是因为这个缘故。于是活体染色技术就应运而生，可以说这是介于活体观察和固定、切片染色之间的一种方法。它的目的是显示活细胞内的某些天然的构造，而不引起细胞的物理、化学的变化。因此活体染色应该显示出动、植物活细胞内某些天然构造存在的真实

5、性。而且在染色过程中对细胞生命不受影响。因此，我们可以给活体染色下这样的定义“7活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色，但又无毒害的一种染色方法。目的在于显示生活细胞内的某些天然结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞结构和生理、病理状态[1,2]。”活体染色与体外活体染色，活体染色是指一个获得动物或植物的细胞活组织被染色。至于体外活体染色是指也获得动物或植物分离出来的一部分细胞或一部分组织被一种活体染色剂染色而不影响细胞活组织的生命。活体染色与体外活体染色的主要区别：活体染色

6、是在有机体内部，因此不在空气中而是在还原的环境中进行的，至于体外活体染色是在空气中，在氧化的环境中进行的。所以一种真正的活体染色剂就是在一种生物的活细胞的某种构造上面的染料，但对于细胞、对于组织和对于生命本身不发生任何有害的作用[3]。原理：一般的生物材料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后，细胞膜被破坏，染料才能进入细胞内部.但是，有一些染料（称“活体染料”）却能进入活细胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂，能使细胞中某些特定结构着色。活体染料基本上不影响或很少影响细胞的生命活动。活体染料多为碱性染料，如中性红、詹纳斯绿B、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油

7、紫等，它们解离后带正电，其中有的染料与胞内某些结构有专一性接合。例如，中性红可专一的使液泡系染色[4]。液泡系是凡是由内膜所包围的小泡和液泡，除线粒体和质体外，都属于液泡系。液泡的类型可分为以下几种：①高尔基液泡，由高尔基体成熟面高尔基地边缘形成的小泡，其中含有水解酶等。②溶酶体，由内质网形成，其中含有水解酶，溶酶体是溶解或消化小体，内含各种水解酶，在动植物细胞中都含有这类细胞器。细菌内没有发现溶酶体。溶酶体的功能有三个方面：正常消化作用、自体吞噬、细胞自溶作用。③圆球体，为植物细胞所特有，相当于溶酶体，也是由内质网形成。④微体，按其中所含的酶来确定

8、它们的性质。⑤自噬小体，由一层膜将一小部分细胞质包围而成，其中被消化的物质是细胞质内含有的各种组成，如线粒体