西南民族大学学生实习日记

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1、西南民族大学学生实习日记教学单位：生命科学与技术学院级、专业：2010级动物医学学生姓名：马英俊学生学号：201031304048实习类别：毕业实习实习单位：动物医学实验室起止时间：2014/3/20-2014/5/12013－2014学年第2学期教务处制使用说明一、本实习日记为参加我校各教学单位按教学计划要求组织的各类实习的学生填写。二、实习学生应如实记录实习过程中主要工作、学习、活动情况及心得体会等内容。三、实习类别填写“课程实习”或“毕业实习”。四、实习日记填写次数根据实习情况而定。五、实习日记作为评定学生实习成绩和实习总结的重要依据。六、本日记使用结束后由各教学单位存档备

2、查。西南民族大学学生实习日记日期：2014/4/13工作、学习、活动纪要：学习跑PCR、跑凝胶电泳技术心得体会、存在问题、改进意见：初次接触PCR扩增,第一次跑电泳，兴趣甚浓。所以对这些技术也很用心地去学习，并加以掌握。虽然结果并不是太合意，但是对这些过程都有了一个较为系统的了解。大致过程如下：以提取的产肠毒素大肠杆菌DNA为模板，用引物对AST基因进行PCR扩增。PCR反应体系：上下游引物各1µL（引物浓度均为10μmol/L），DNA模板1µL，ddH2O17.3µL，总体系为25µL。PCR反应条件：95℃预变性5min；变性95℃、30s，65℃退火、30s，延伸72℃、

3、45s，35个循环；最后72℃延伸5min。PCR扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测，并统计阳性结果。在加体系的时候要遵循先多后少的原则，减少误差。至于配胶的时候，要注意尽量将琼脂糖加热到透明状态。给凝胶点样的时候要遵从“阴性第一个加，阳性最后一个加，保证无污染”原则。日期：2014/4/14工作、学习、活动纪要：学习RT—PCR技术并总结出现的问题。心得体会、存在问题、改进意见：RT-PCR的要求有：1.做RT前必需检测RNA的完整性和RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2.RT按要求做，一般不会出太大问题。 3.PCR，按常规。但如需扩长片段

4、，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在。出现问题可能的原因：1.总RNA质量不好。在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。RNA酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。外源性的RNA酶存

5、在于操作人员的手汗、唾液等，也可存在于灰尘中。在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。这些外源性的RNA酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。2.引物设计的问题。3.PCR条件的优化。西南民族大学学生实习日记日期：2014/4/15工作、学习、活动纪要：PCR检测AST毒力基因。心得体会、存在问题、改进意见：这一次还是按照原来的体系加样，按照原来的程序跑PCR，跑电泳。可是结果却很难看。之所以跑不出结果，我总结原因如下：根据出现的纹路条带来看，可能是时间太久了的缘故。因为我是用电压100v；电流9

6、0MA跑的电泳。但是过了50分钟的时间之后我才去照胶。并且从markⅠ的片段来看，确实是跑过度了。这次实验告诉我一定要把握好时间，一般蓝色条纹到了第三个格差不多就可以去照胶了。平时使用85v电压、85MA电流跑电泳一般能跑出很不错的结果日期：2014/4/16工作、学习、活动纪要：学习和掌握生化试验心得体会、存在问题、改进意见：细菌的生化反应是指各种微生物生化试验方法原理通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，常用于细菌的鉴别。主要通过以下试验方法进行鉴定：1、糖类分解产物（1）糖发酵试验（carbohydratefermentationtest）；（2

7、）VP试验（Voges-Proskauertest）；（3）甲基红试验（methylredtest）；（4）枸橼酸盐利用试验(citrateutilizationtest）。2、蛋白质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢试验（hydrogensulfidetest）；（2）明胶液化试验；（3）吲哚试验（indoletest）。西南民族大学学生实习日记日期：2014/4/17工作、学习、活动纪要：astA毒力基因的检测心得体会、存在问题、改进意见：这些天几乎每天都在跑PCR，每天都要跑电