NYT572-2002兔出血病血凝和血凝抑制试验方法.pdf

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1、11.220器1中华人民共和国农业行业标准NY/T572-2002兔出血病血凝和血凝抑制试验方法Haemagglutinationandhaemagglutinationinhibitiontestsforrabbithaemorrhagicdisease2002一08一27发布2002一12一01实施中华人民共和国农业部发布567NY/'e572-2002前言兔出血病(曾称兔病毒性出血症)，是兔的毁灭性疫病，世界动物卫生组织{WorldOrganizationforAnimalhealth(英),OfficeInternationaldesEpizooties(法),OIE]和

2、我国分别将之列为f3类和二类动物疫病。本标准采用了(AE《诊断试验和疫苗标准手册)>(2000版)(ManualofStandardsforDiagnosticrestsandVaccines)第2.8.3章规定的常规诊断方法(该方法最早系由我国建立)，与该章的规定相比，本标准特点:根据本国实践经验，将其具体化，成为操作程序。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由个国动物检疫标准化技术委员会归no本标准起q.单位:江苏省农业科学院畜牧兽医研究所本标准主要起草人:王启明、董亚芳。572NY/T-2002兔出血病血凝和血凝抑制试验方法1范围本标准规定了兔出血病血凝和血凝抑制试验的技术

3、要求。本标准适用于兔出血病的诊断和流行病学调查。2血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)2.1材料和试荆02.1.1可疑兔及正常兔肝悬液的制备:分别将肝脏剪碎、按1:1。加入牛理盐水后匀浆再以4r/min离心30min，取上清液做血凝试验2.1.2生理盐水2.1.3阿氏液(Alsever}s)成分:葡萄糖(化学纯)20"K氯化钠门.12K柠檬酸钠(Na,C,H,;O,·2H())(化学纯)比8!'柠檬酸(H〔’H;(),·H())(化学纯)().055kA馏水100ml制法:将以1_药品混合加热溶解、过滤.65.94kPa15min火菌，4交保存备用2.1.41%人‘()"NY9

4、1*细胞悬液的制备:取新鲜人‘'()"}'I红细胞于阿氏液中保存(置4Y'可保存一周)。用时取人‘，()”酬红细胞以2。倍量生理盐水混匀洗涤红细胞，2000r/ntin离心15min，弃仁清，重复洗涤4次.最后一次离心前，计算红细胞悬液体积(在离心后扣减弃去L清液的体积.即为红细胞的体积)。洗涤后的红细胞用生理盐水配成1%悬液，置4(备用。2.1.5阳性血清。2.2微f血凝试验2.2.1在96孔VI1微量滴定板上，从第2孔至第11孔，每孔加人生理盐水(0.025ml。2.2.2然后在第1,2孔加人1:10的可疑兔肝悬液。025ml.2.2.3从第2孔开始，充分混合后用。.025m

5、l移液管作等量倍比稀样至第10孔，最后1孔弃去0.025ml。2.2.4第11孔是生理盐水对照，第12孔加1:1。的正常兔ff悬液对照2.2.5每孔各加1写人’..Cl.l型红细胞0.025m工J，立即在微型振荡器卜摇匀.置4C冰箱45min，待对照孔的红细胞完全沉积后观察结果。2.2.6结果判定和红细胞凝集效价表示方法们“十十一++”符号为1000,凝集，无红细胞沉积;67“+干一卜”符号为75%以上凝集，有少于25%,的红细胞沉积;c)“一十十”符号为50%-75%凝集，有少于500,的红细胞沉积;山“+”符号为凝集的红细胞少于50%沉积的红细胞多十50.'NY/'r572一

6、2002的“一”符号为100%的红细胞沉积。出现+十的最高稀释度作为其凝集价，凝集价妻1=160(即第‘孔、的判为阳性，如在(1:20)--(t:80)之问，定为可疑，应重做，重做后仍为可疑的判为阳性。2.3微，血凝抑制试验2.3.1从第t排开始到第11孔每孔加生理盐水0.025ml。2.3.2第2孔加，，丁疑兔肝组织悬液0.025m12.3.3稀释方法同2.2.3。其他各排与此相同。2.3-4第12孔为正常兔肝悬液对照。2-3.5第2排起每孔加阳性血清0.025mL，于微型振荡器上摇匀，37C温箱放置10min.2.3.6侮孔加人1%人“()"1.红细胞0.025mL·立即在微

7、型振荡器上摇匀N4C冰箱作用45min，待对照孔红细胞完个沉积后观察结果。2.3.7结果判定:第1排微量血凝试验和其他微量血凝抑制试验相应两排孔的血凝效价相差2个滴度以卜(含2个滴度)为阳性。3现场快速诊断(玻片血凝法)用直径5mm滤纸片插人可疑兔肝片刻，取出滤纸片放入预先已经滴有1%人“O"型红细胞的玻片上，若有兔出血病病毒、肉眼可直接观察到血凝现象。