二剂量法与稀释法的比较

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1、深圳技师学院应用生物系《抗生素药物稀释法与管碟法的抗菌试验》论文项目名称：抗生素药物稀释法与管碟法的抗菌试验项目组长：唐鹏程项目组成员：唐鹏程张君曼许杰生肖伟亨谢秋惠蒋铭强李淑霞郑慧珠陈芃仲李文婷张妮何磊班级：10生物J4指导教师：任茜莫全毅二0一三年三月二十一日抗生素药物稀释法与管碟法的抗菌试验研究唐鹏程1谢秋惠2张君曼3李淑霞4等（全组皆为深圳技师学院，广东，深圳518040)摘要：抗生素（antibiotics）是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他

2、生活细胞发育功能的化学物质。现临床常用的抗生素有微生物培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成的化合物。目前已知天然抗生素不下万种。抗生素已经广泛使用于我们的生活，检测药物最大抗菌效价常用方法，有药物稀释法和管碟法，为了更好的比较二种方法各自优缺点也为了方便以后实验研究提供依据。关键词：抗生素；稀释法；管碟法；抗菌效价试验方法选取药物：氯霉素滴眼液规格：8ml20mg国药准字H44020212批号130115菌种：藤黄微球菌（Micrococcusluteus）培养基：营养肉汤培养基，营养琼脂培养基，抗生素效价2号培养基，0.9％生理盐

3、水1.预试验1.1复苏：取藤黄微球菌（Micrococcusluteus）冻干粉一支自然解冻，准备一瓶灭菌好的营养肉汤100ml，无菌操作，（37℃,24h）摇床培养。1.2琼脂斜面：取复苏好的藤黄微球菌（Micrococcusluteus）用接种环顶点沾一下在灭菌好的斜面划线（37℃,24h）培养即可。1.3菌液制备：从上面斜面的培养物中（用接种环顶点沾一下即可）接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养18h，用直径3mm的接种环取一环菌液接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养6h即可，4℃保存。1.4找到藤黄微球菌适合的梯度：从上面斜面

4、的培养物中（用接种环顶点沾一下即可）接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养18h，用直径3mm的接种环取一环菌液接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养6h取出，在无菌操作下，用生理盐水稀释至，取，，做细菌总数计数。稀释梯度至，细菌总数计数表1无法计数158442无法计数14452平均菌落数无法计数15148结论：由稀释梯度至，细菌总数计数表可知，为我们所需要的梯度。一．试管法（无菌操作）2.药物稀释法2.1预实验（2批）：取营养肉汤100ml，试管10支，第一管加药物1ml+9ml肉汤充分混合，第二管取第一管中1ml+9ml肉汤混匀，第三

5、管取第二管1ml+9ml肉汤混匀，以此类推至第九管，取出1ml弃去，第十管不加药，只加了营养肉汤9ml。稀释完毕后，十管的药物稀释度为，，…，，及阴性。2.2菌液制备：在上述的1.3中，菌液制备最后所得的菌液中取1ml用营养肉汤作为稀释剂梯度稀释至，用灭过菌的移液枪每管加0.05ml，第九管不加菌作为阴性对照，第十管不加药物加菌为阳性对照。加完菌后充分混匀，经37℃培养18h后判断结果。药物稀释法找出最大抗菌效价表，加菌量为0.05ml结果阴性阳性第一批－－＋＋＋＋＋＋－＋第二批－－＋＋＋＋＋＋－＋抗菌效价（u）250252.5/////

6、//备注：“－”表示澄清，“＋”表示浑浊，“/”表示没必要算由药物稀释法找出最大抗菌效价表，可知药液的最高稀释倍数为100倍，药物抗菌效价为20x1000/8=2500u,第一管为250u，第二管为25u，第三管为2.5u。2.3确定（最大抗菌效价，6批）：每批取营养肉汤100ml，试管7支，第一管加药物1ml+9ml肉汤充分混合，第二管取第一管中2ml+18ml肉汤混匀，第三管取第二管10ml+10ml肉汤混匀，第四管取第三管10ml+10ml肉汤混匀，第五管取第四管10ml+10ml，第六管取第二管1ml+9ml，第七管不加菌作为阴性

7、对照，第八管不加药物加菌为阳性对照。药物稀释度为1:10,1:100,1:200,1:400,1:800,1：1000，加完菌后充分混匀，经37℃培养18h后判断结果。药物稀释法扩大梯度范围找出更加准确的抗菌效价表结果1：101:1001:2001:4001:8001:1000阴性阳性第一批－－－－＋＋－＋第二批－－－－＋＋－＋第三批－－－－＋＋－＋第三批－－－－＋＋－＋第四批－－－－＋＋－＋第五批－－－－＋＋－＋第六批－－－－＋＋－＋试验结果：本试验所采用的藤黄微球菌在肉汤培养基中，正常情况下均为混浊生长，培养基经培养透明正常，保持原来

8、一样状态，无细菌生长为抑菌（杀菌），以不长菌的药液最高稀释倍数为该药的抑菌效价，由药物稀释法抗菌效价表，可知1:400为最大稀释倍数，最大抗菌效价为2500/400=6.25u。二、管碟法（2