饲料原料中赭曲霉毒素的快速筛查胶体金快速定量法

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1、《饲料原料中赭曲霉毒素的快速筛查胶体金快速定量法》江西省地方标准编制说明一、标准制定意义（一）介绍赭曲霉毒素A是由多种生长在粮食（小麦、玉米、大麦、燕麦、黑麦、大米和黍类等）、花生、蔬菜（豆类）等农作物上的曲霉和青霉产生的。动物摄入霉变饲料后，这种毒素也可能出现在猪和母鸡等的肉中。赭曲霉毒素主要损害动物肝脏与肾脏，引起肝脏和肾脏损伤，大量毒素也可能引起动物肠黏膜炎症和坏死。有报道指出，食物中的OTA与一种致命的地方性肾脏疾病（balkanendemicnephropathy）有关，且有致癌、致畸作用，近年来引起了人类营养学家的重视。正常条件下，小麦和玉米受OTA污染的机率较小，约1%～

2、5%，其含量为0.01～5mg/kg；大麦和燕麦被污染的机率较高，约为10%，其含量一般在0.1mg/kg以下，个别样品高达27mg/kg。赭曲霉毒素包括3种类型，毒性强弱顺序是：OTA>OTC>OTB。OTB是OTA的脱氯衍生物，OTC是OTA的乙基酯，OTB和OTC的含量一般较低，毒性较OTA小。因此，饲料检测时可以主要分析OTA含量。目前，小麦、大麦、玉米等谷类作物中OTA的测定方法有薄层色谱法（TLC）、酶联免疫吸附法（ELISA）、气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）、高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS）。TLC法繁琐费时，且灵敏度、特异性较差，提取过程中所需有机

3、溶剂品种多且量大，易污染环境，对人体有较大危害。ELISA法测定结果受试剂盒差异、实验温度、仪器灵敏度等条件影响较大。GC、GC-MS、HPLC和HPLC-MS8法普遍存在着样品前处理过程复杂，灵敏度易受样品的净化、浓缩等步骤的影响，耗时，检测设备昂贵，并要求有专业的技术人员及较长的分析周期。同时，这些检测方法无一例外要求在检测过程中使用毒素标准溶液，给环境和检测人员的安全造成风险。本标准项目是通过化学合成法制备赭曲霉毒素A人工抗原，利用此抗原免疫实验动物制备赭曲霉毒素A单克隆抗体，基于此原料基础上开发赭曲霉毒素A快速检测试纸条，再通过胶体金读数仪进行大米、玉米、小麦等样品中赭曲霉毒素

4、的定量分析。定量分析便于将检测结果与国家限量对比，有助于监管部门根据粮食的污染水平进行粮食分级管理，同时有助于企业内部更好地进行质量控制。本标准可提高粮食样品检测、监测效率，降低成本，保护环境，保障从业人员健康安全。（二）背景据联合国粮农组织（FAO）统计，全世界每年谷物产量的25%受到真菌毒素不同程度的污染。随着饲料工业的快速发展，近年来，中国的饲料也受到霉菌污染的严重挑战。自2006年以来，玉米等饲料原料价格普遍上涨，致使很多饲料企业及养殖户使用低质饲料原料，加上近年来气候的变化，华北、东北地区降雨量增加，进一步加重了饲料原料中真菌毒素的污染。而由于饲料原料和配合饲料中多种真菌毒素

5、同时存在，在食用油等产品及牛奶中真菌毒素污染也比较严重。在世界许多地方，目前真菌毒素已构成重要的食品安全问题。真菌毒素对人类和动物健康可产生严重的影响，这一认识导致了许多国家在近几十年来制定了诸多有关食品和饲料中真菌毒素的法规，以保护人类的健康，并保障生产者和贸易商的经济利益。随着全球经济一体化的进程，类似真菌毒素等涉及安全卫生项目的限量标准，越来越多地被利用为贸易保护主义中非关税壁垒的重要手段。因此，为了保证食品安全，保障消费者的健康，为了打破国外的技术壁垒，同时在合理有利的前提下，更多地树立我国的技术性壁垒，开展饲料中真菌毒素的检测并建立标准方法是有效的方法之一。目前国内应用标准检

6、测方法大多为仪器方法，所需仪器设备昂贵，不利于进行广泛推广，并且限制了很多检测单位高效、广泛地开展检测工作。建立符合中国国情的快速检测方法标准，具有检测快速、简便、灵敏、成本低等优点，为打开市场并占领市场提供了先决条件。（三）限量标准、检测方法及研究现状1、限量标准世界各国均对食品中赭曲霉毒素A的含量做出了严格的规定。欧盟关于赭曲霉毒素A的限量标准分类最为详细，未加5工谷物为μg/kg，由未加工的谷物制备的所有产品，包括加工的谷物制品及直接供人食用的食物为3.0μg/kg，供婴幼儿食用的谷类加工食品和婴儿食品为0.5μg/kg。我国对食品中赭曲霉毒素A的限量标准（GB2761-2011

7、）是：谷物及其制品≤5μg/kg；豆类及其制品≤5μg/kg。我国对饲料中赭曲霉毒素A的限量标准（GB13078.2-2006）是：配合饲料和玉米≤100μg/kg。表1我国饲料中的赭曲霉毒素A限量标准8产品名称限量/(μg/kg)谷物及其加工产品≤100配合饲料≤1002、检测方法及研究现状真菌毒素的检测方法主要有两种，一是将色谱技术作为基础的物理化学检测方法，包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等，而薄层层析法（TLC）由于操