nbt自动分析法测定d―3羟丁酸

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1、NBT自动分析法测定D―3羟丁酸　　[摘要]目的建立简便和灵敏的双试剂自动化分析法测定血清D-3羟丁酸。方法在NAD和D-3羟丁酸脱氢酶存在下，用氯化硝基四氮唑兰（NBT）作为显色剂测定血清中的D-3羟丁酸。结果该法线性范围为0～7.0mmol/L，平均回收率为98.7%，批内变异系数和批间变异系数均小于2%，与对照试剂盒比较有良好的相关性（r2=0.996），具有良好的抗干扰能力。150例健康人血清D-3羟丁酸含量为0.03～0.30mmol/L。结论NBT自动分析法测定D-3羟丁酸方法简便、灵敏可靠、适合临床应用。　　[关键词]D-3羟丁酸；血清；自动分析法；NBT

2、　　[中图分类号]R446.1[文献标识码]B[文章编号]2095-0616（2014）13-115-03　　[Abstract]ObjectiveToestablishasimpleandsensitiveautomaticmethodfordeterminationofD-3-hydroxybutyricacidinserumwithtworeagents.MethodsWiththeexistenceofNADandD-3-hydroxybutyratedehydrogenase，D-3-hydroxybutyricacidinserumwasdetermined

3、byNBTasacolor-developingagent.ResultsThelinearityrangeofthemethodwas0-7.0mmol/L，averagerecoveryratewas98.7%，andboththeintra-assayandinter-assaycoefficientsofvariationwerelessthan2%.Therewasagoodcorrelationcomparedwiththereferencekit（r2=0.996），andthecapacityofresistinginterferencewasgood.

4、TheconcentrationofD-3-hydroxybutyricacidintheserumof150healthypeoplewas0.03-0.30mmol/L.ConclusionTheNBTautomaticanalysismethodfordeterminationofD-3-hydroxybutyricacidissimple，sensitiveandreliable，whichisappropriatetobeappliedclinically.　　[Keywords]D-3-hydroxybutyricacid；Serum；Automatican

5、alysismethod；NBT　　糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病，酮症及酮症酸中毒是糖尿病患者最常见的并发症[1-2]，糖尿病酮症酸中毒是指糖尿病患者在各种原因的作用下，胰岛素不足，生糖激素异常升高，而导致的高血糖、高血酮、水电解质酸碱失衡等。在肝脏中，脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸、D-3羟丁酸及丙酮，三者统称为酮体，其中D-3羟丁酸是酮体主要的成分，约占其总量的70%，因此临床以检测血清中D-3羟丁酸的浓度来反映体内酮体的水平[3-4]。D-3羟丁酸检测方法有气相色谱法[5]、分光度法和酶法，酶法在准确性、抗干扰能力和重复性等方面具有特殊的优势[6]，但

6、价格都比较昂贵。而国内现有国产D-3羟丁酸试剂盒所用的显色剂均为INT，还没有使用NBT作为显色剂的方法。我们首次报道以NBT作为显色剂，双试剂两点终点法自动化测定血清D-3羟丁酸的新方法。该法准确、灵敏、稳定，值得临床推广。　　实验原理：采用酶化学比色法来测定血清中的D-3羟丁酸，先将血清中的D-3羟丁酸氧化为乙酰乙酸，同时将辅酶Ⅰ还原为还原型辅酶Ⅰ，还原型辅酶Ⅰ在黄递酶的催化下将NBT生成红色显色物质，在505nm处检测吸光度的变化来计算血清中D-3羟丁酸的浓度。　　D-3羟丁酸+辅酶Ⅰ乙酰乙酸+还原型辅Ⅰ　　还原型辅酶Ⅰ+NBTformazane（红色）　　1材料

7、与方法　　1.1试剂　　2结果　　2.1灵敏度　　将总浓度为1.0mmol/L的D-3羟丁酸用生理盐水将做100倍稀释，同时测定10次，分别计算出各浓度梯度的标准差和平均值；当D-3羟丁酸的浓度为0.01mmol/L时，平均值-3标准差>3标准差。表明灵敏度可达0.01mmol/L。　　2.2线性范围　　使用生理盐水对1份D-3羟丁酸浓度为8mmol/L的高值血清样本进行稀释，分别是0.01、0.02、0.04、0.08、0.20、0.40、0.80、2.00、4.00、8.00mmol/L10个不同浓度，各浓度均检测5次，进行相关分析，