双酶切反应通用缓冲液使用表

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1、DoubleDigestion(双酶切反应)时UniversalBuffer(通用缓冲液)的使用表■说明使用二种酶同时进行DNA切断反应(DoubleDigestion)时,为了节省反应时间,通常希望在同一反应体系内进行。TaKaRa采用UniversalBuffer表示系统,并对每种酶表示了在各UniversalBuffer中的相对活性。尽管如此,在进行DoubleDigestion时,有时还会难以找到合适的UniversalBuffer。本表以在pUC系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心,

2、显示了在DoubleDigestion可使用的最佳UniversalBuffer条件。在本表中,各UniversalBuffer之前表示的[数字×]是指各UniversalBuffer的反应体系中的最终浓度。TaKaRa销售产品中添附的UniversalBuffer全为10倍浓度的缓冲液。终浓度为0.5×时反应体系中的缓冲液则稀释至20倍,1×时稀释至10倍,2×时稀释至5倍进行使用。■注意◇1μgDNA中添加10U的限制酶,在50μl的反应体系中,37℃下反应1小时可以完全降解DNA。◇为防止

3、Star活性的产生,请将反应体系中的甘油含量,尽量控制在10%以下。◇根据DNA的种类,各DNA的立体结构的差别,或当限制酶识别位点邻接时,有时会发生DoubleDigestion不能顺利进行的可能。

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