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1、精方健发毛囊再生素科学生发奥秘解析！毛囊细胞再生素（FCF）对毛囊外根鞘细胞增值的影响提 要:目的 探讨毛囊细胞再生素Follicularcellsfactor（FCF）对体外培养的毛囊外根鞘(Outerrootsheath,ORS)细胞增殖的作用。方法 体外培养了小鼠ORS细胞;用MTT法研究了uPA促进因子肝细胞生长(Hepatocytegrowthfactor,HGF)和uPA抑制因子Amiloride处理后ORS细胞的增殖变化;用RT2PCR方法研究了ORS细胞的uPAmRNA的表达情况,以及FCF和Amiloride处理ORS细胞
2、后uPA的mRNA表达的变化。结果 体外培养的ORS细胞有uPA表达;FCF可促进uPAmRNA的表达并促进ORS细胞的增殖;Amiloride抑制uPAmRNA表达并抑制ORS细胞增殖。结论 毛囊ORS细胞表达uPA,FCF促进uPA的表达并促进ORS细胞增殖,Amiloride通过抑制uPA的表达和其活性抑制ORS细胞的增殖。关键词: 毛囊细胞再生素;外根鞘细胞;FCF;AmilorideTheFollicularcellsfactorintheproliferationofouterrootsheathcellsAbstract:Ob
3、jective Toinvestigatetherolesofurokinase2typeplasminogenactivator(uPA)intheproliferationofculturedouterrootsheath(ORS)cells.Methods TheORScellsofthemousevibrissafolliclewereculturedinvitro.TheeffectsofFollicularcellsfactor（FCF）andAmilorideontheproliferationofORScellswereob
4、servedwithMTT.ORScellstreatedwithFCFandAmiloridewereanalyzedbyRT2PCRoftheuPAgene.Results TheORScellsexpresseduPAmRNA;FCFpromotedandAmilorideinhibitedtheuPAmRNAproductionandtheproliferationofORScells.Conclusion ORScellscouldexpressuPAmRNA,FCFmightpromotetheexpressionofuPAan
5、dtheproliferationofORScellsthroughinhibitingtheexpressionandtheactivationofuPA,AmilorideinhibittheproliferationofORScells.Keywords:Follicularcellsfactor;outerrootsheathcell;FCF;amiloride毛囊细胞再生素Follicularcellsfactor（FCF）是蛋白酶家族的成员,在体内广泛参与纤溶、排卵、组织修复、细胞迁移等过程。以前的工作发现,人和小鼠毛囊发育的早
6、期在毛囊的外根鞘(Outerrootsheath,ORS)及毛母质等角质形成细胞中有uPA强表达,推测其表达与角质形成细胞的快速增殖有关[1]为了验证此假说,本实验体外培养了小鼠毛囊角质形成细胞的主要成分ORS细胞,加入uPA的促进剂肝细胞生长因子观察二者对ORS细胞增殖的影响及对ORS细胞uPAmRNA表达的影响,以期获得uPA促进角质形成细胞增殖的直接证据。1 材料与方法1.1 小鼠毛囊ORS细胞的原代培养取生后2d小鼠,75%酒精消毒后,剪下触须区皮肤迅速放入D2Hank's液中,反复冲洗,置于解剖镜下小心地用小号针头分离触须毛囊,取
7、形态完整,处于生长期的触须毛囊接种于25ml培养瓶中,用含10%胎牛血清(FCS)(Hyclone)的DMEM/F12(Hyclone)培养基于37℃,5%CO2孵箱培养。1.2 ORS细胞的纯化对原代培养细胞中混杂的少量成纤维细胞,按本室常规方法用0125%胰蛋白酶消化,待成纤维细胞脱壁后倾去消化液,用含10%FCS的DMEM/F12培养基冲洗瓶壁,得到纯化的ORS细胞。1.3 ORS细胞的鉴定用ORS细胞特异性表达角蛋白19(Cytokeratin19,CK19)抗体确认培养的细胞为ORS细胞。将原代细胞消化后,按2×105/ml接种于
8、盖玻片上,次日取出用4%多聚甲醛固定30min,PBS漂洗5min×3次后进行免疫细胞化学染色,CK19抗体为小鼠抗人和动物CK19(博士德),用山羊抗小鼠SABC试剂盒(博士德
