兔子糖化血红蛋白a1c(ghba1c)酶联免疫分析

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1、兔子糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E07011Rb检测范围：15.6ng/ml-1000ng/ml最低检测限：3.9ng/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的兔子GHbA1c，且与其他相关蛋白无交叉反应。有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定兔子血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中GHbA1c含量。说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。3．中、英文

2、说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。概述糖化血红蛋白A1c(glyocosylatedHbA1，HbA1c)是自身血红蛋白通过非酶促糖化反应形成的产物。成人红细胞内的血红蛋白主要是HbA1c，糖化血红蛋白是血红蛋白在高血糖的作用下发生缓慢连续的非酶促糖化反应的产物，其主要形式为HbA1c，此外尚有HbA1a1、HbA1a2及HbA1b三种。HbA1c的形成过程先由血红蛋白β链N末端缬氨酸的氨基与巳糖（主要为葡萄糖）的醛基发生加成反

3、应形成中间产物醛亚胺，称为前HbA1c。此反应迅速且可逆，故又称不稳定型HbA1c；继而通过Amadori转位，分子重排形成酮胺，其速度缓慢但不可逆，称为稳定型HbA1c。β链N末端缬氨酸的糖基化并未影响与2，3二磷酸甘油酸的结合，但改变了其复合的立体构象及正电荷的表面分布。正常生理条件下，非酶促糖化反应产物的生成量与反应物的浓度呈正比。由于蛋白质浓度保持相对稳定，糖化水平主要决定于葡萄糖浓度，也与蛋白质与葡萄糖接触的时间长短有关。由于葡萄糖可自由透过红细胞膜，血红蛋白的半衰期为60天，故HbA1c的测定可反映测定前6-10周

4、内的平均血糖水平。实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗GHbA1c抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗GHbA1c抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的GHbA1c呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assayplate)：一块（96孔）。2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。3.样品稀释液(SampleDilue

5、nt)：1×20ml/瓶。4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。4本文来自：bet365www.750303.comwww.821sf.com网赚网赚论

6、坛www.iozoe.combet365体育在线www.daj8.net网赚www.377778.comwww.meixinjin.com1.浓洗涤液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。2.终止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6.蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于

7、室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确

8、定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度