本标准根据农业部1993

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1、NY329—1997前　　　言　　本标准根据农业部1993年下达的制定行业标准《苹果无病毒苗木繁育规程》计划编制。　　本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录。　　本标准由中华人民共和国农业部提出。　　本标准由中国农业科学院果树研究所、河北农业大学、农业部农业司、山东省农业厅果茶站、辽宁省农业厅果蚕站负责起草。　　本标准主要起草人：王国平、马宝、史光瑚、孔庆信、孙守友、洪霓。1范围　　本标准规定了苹果无病毒苗木的质量要求，适用于全国各苹果苗木产地及栽培区。2引用标准　　下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效

2、。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。　　GB8370—87 苹果苗木产地检疫规程　　GB9847—88 苹果苗木　　GB12943—91 苹果无病毒母本树和苗木检疫规程3定义　　本标准采用下列定义。3.1苹果无病毒母本树　　指用苹果无病毒原种材料繁育的用于提供品种接穗或营养系砧木的母株。3.2苹果无病毒砧木　　指用无病毒无性系砧木母本树材料繁育的无性系砧木或未经嫁接的实生砧木。3.3苹果无病毒苗木　　指用无病毒接穗和无病毒砧木繁育的苹果嫁接苗或用无病毒材料通过组织培养方法繁殖的苹果自根苗。4质量要求4.1不带下列病毒及类病毒。4

3、.1.1苹果绿皱果病毒 Applegreencrinklevirus。4.1.2苹果锈果类病毒  Applescarskinviroid。4.1.3苹果花叶病毒 Applemosaicvirus。4.1.4苹果褪绿叶斑病毒 Applechloroticleafspotvirus。4.1.5苹果茎痘病毒 Applestempittingvirus。4.1.6苹果茎沟病毒 Applestemgroovingvirus。4.2不带GB8370中规定的检疫对象。4.3苗木规格符合GB9847标准的质量要求。5检测方法5.1田间症状鉴定法5.1.1苹果绿皱果病毒、锈果类病毒和

4、花叶病毒三种显性病毒在苹果树上有明显症状，可直接在田间进行观察。5.1.2三种显性病毒在苹果树上的症状见表1。表1        病毒种类       主要症状苹果绿皱果病毒 病株的幼果表面出现水渍状斑块，逐渐发展为凹凸不平畸形果，病部果皮逐渐形成木栓化呈锈色苹果锈果类病毒 锈果型：先从顶部出现淡绿色水渍状斑块，最后向果梗扩展成栓化锈斑与纵纹。 花脸型：果实着色后表现红绿相间花脸状。 锈果-花脸复合型：呈现有锈斑又有花脸的复合症状。苹果花叶病毒 斑驳型：从小叶脉开始发生鲜黄色病斑，形状不规则，大小不一。 环斑型：病树叶上产生圆形或椭圆形黄色环斑。 花叶型：病斑不规则

5、，有较大的深绿、浅绿相间色。 条斑型：病树叶片沿叶脉失绿黄化。 镶边型：病叶片的边缘发生黄化5.2指示植物检测法5.2.1苹果褪绿叶斑病毒、茎痘病毒、茎沟病毒三种潜隐病毒和花叶病毒、锈果类病毒可采用木本指示植物检测法。5.2.2检测上列五种病毒的木本指示植物是：　　a）苏俄苹果（R12740-7A）：检测苹果褪绿叶斑病毒；　　b）司派227（Spy227）或光辉（Radiant）：检测苹果茎痘病毒；　　c）弗吉尼亚小苹果（Virginiacrab）：检测苹果茎沟病毒；　　d）兰蓬王（Lordlambourne）：检测苹果花叶病毒；　　e）国光（Ralls）：检测苹果

6、锈果类病毒。5.2.3五种病毒在木本指示植物上的主要症状表现见表2。表2   病毒种类      指示植物症状苹果褪绿叶斑病毒        5月中下旬以后，在苏俄苹果叶片上出现褪绿斑点，多发生于叶片一侧，病株叶 片较健株叶片小。有的向一侧弯曲呈舟形叶，植株矮化，或生长衰弱    苹果茎痘病毒        5月中下旬以后，在光辉指示植物上出现叶片反卷，植株矮化。在Spy227指示植 物上出现叶片反卷、皮层坏死等症状     苹果茎沟病毒    只在费吉尼亚小苹果上表现症状，病株较健株矮小，叶片小而色淡，有的病株嫁 接口周围肿胀，接合部内有深褐色坏死环纹。木质部产生

7、深褐色纵向陷条沟，严重时从外部即可辨认。在温室鉴定中，表现叶部黄斑或环状斑、叶片扭曲变形  苹果花叶病毒  叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑 苹果锈果类病毒  弯叶和茎干锈斑、坏死斑5.2.4木本指示植物检测法可在田间和温室内进行，其操作步骤分别见附录B和附录C。5.3血清学检测法5.3.1本法采用A蛋白酶联免疫吸附法（PAS-ELISA），其操作步骤见附录A。5.3.2凡能制备出抗血清的苹果病毒均采用本法进行检测。6检验规则6.1检验步骤6.1.1档案核查：在进行病毒抽样检测之前，要检查无病毒苗圃是否有无病毒苗木生产许可证和无病毒苗木准产数量证明，并要对其使用的接穗