组织培养实验-ms培养基及配制注意事项

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1、一、MS培养基母液的配制母液成　分1倍培养基用量浓缩倍数称取量（mg）母液体积（ml）配制1升培养基吸取量（ml）编号种类1大量元素KNO3190010190001000100NH4NO316501016500MgSO4·7H2O370103700KH2PO41701017002CaCl2·2H2O44010440010001003微量元素MnSO4·4H2O22.31002230100010ZnSO4·7H2O8.6100860H3BO36.2100620KI0.83100083010001Na2MoO4·7H2O0.251000250CuSO4.5H2O0

2、.025100025CoCL2.6H2O0.0251000254铁盐Na2-EDTA37.31003730100010FeSO4.4H2O27.810027805有机物甘氨酸2.05010050010盐酸吡哆醇（VB6）0.55025盐酸硫铵素（VB1）0.1505烟酸0.550256肌醇10050500050010注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至

3、刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶

4、中，贴上标签。4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量=母液体积（CC）×——

5、————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg，NAA用少量95%酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT称50mgKT用少量1NHCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。(三)　配制培养基（1000ml）1.琼脂:称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止.2.蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼脂的300ml蒸

6、馏水中。3.各种母液的吸取（培养基1L）（1）用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml（2）分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml（3）用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml（4）移取激素　将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80℃左右，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求5.8~6.0，过酸过碱则用1NNaoH和1NHCL调整。二．分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装到25-30个三角瓶中，每个三角瓶约30ml左右（一般占

7、试管、三角瓶容量1/4~1/3左右）注：培养基勿碰瓶壁。三.　包装：分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进行灭菌。用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。三、高压蒸汽灭菌锅的使用方法具体操作步骤：1.高压锅放水至平把架；2.把包扎好的培养基装入高压锅;3.盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀.4.然后接通电源.5.压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)。6.排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭菌时间，具体

8、方法：当压力锅指针升至0.12MPa时