snt1151.2-2011 对虾白斑病检疫技术规范

《snt1151.2-2011 对虾白斑病检疫技术规范》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１１５１．２—２０１１代替ＳＮ／Ｔ１１５１．２—２００２，ＳＮ／Ｔ１１５１．６—２００４对虾白斑病检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉狑犺犻狋犲狊狆狅狋犱犻狊犲犪狊犲２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１１５１．２—２０１１前言ＳＮ／Ｔ１１５１系列标准共分为六部分：———虾桃拉综合征检疫技术规范———对虾白斑病检疫技术规范——

2、—斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）诊断方法———虾黄头病检疫技术规范———对虾杆状病毒（ＢＰ）检验方法———对虾白斑病毒斑点杂交和原位杂交检测操作规程本部分为ＳＮ／Ｔ１１５１的第２部分。本部分按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本部分代替ＳＮ／Ｔ１１５１．２—２００２《对虾白斑病毒（ＷＳＶ）聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测方法》和ＳＮ／Ｔ１１５１．６—２００４《对虾白斑病毒斑点杂交和原位杂交检测操作规程》。本标准与ＳＮ／Ｔ１１５１．２—２００２和ＳＮ／Ｔ１１５１．６—２００４相比，主要技术变化如下：增加了

3、临床症状和综合判定方法。本部分主要参考世界动物卫生组织（ＯＩＥ）《水生动物疾病诊断手册》（２００９版）中２．２．５章。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中国水产科学研究院黄海水产研究所、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本部分主要起草人：何俊强、刘荭、黄倢、杨冰、雷质文、岳志芹、高隆英、江育林、史秀杰。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：———ＳＮ／Ｔ１１５１．２—２００２；———ＳＮ／Ｔ１１５１．６—２００４。Ⅰ版权所有·禁止翻制、电

4、子发售犛犖／犜１１５１．２—２０１１对虾白斑病检疫技术规范１范围ＳＮ／Ｔ１１５１的本部分规定了对虾白斑病的ＰＣＲ、斑点杂交和原位杂交等检测方法。本部分适用于对虾白斑病的流行病学调查、监测、诊断和检疫。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法ＧＢ／Ｔ１８０８８出入境动物检疫采样３缩略语下列缩略语适用于本文件ＷＳＤ（ｗｈｉｔｅｓｐｏｔ

5、ｄｉｓｅａｓｅ）：对虾白斑病ＷＳＶ（ｗｈｉｔｅｓｐｏｔｖｉｒｕｓ）：对虾白斑病毒ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）：聚合酶链式反应ＮＢＴ（ｎｉｔｒｏｂｌｕｅｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ）：氮蓝四唑ＢＣＩＰ（５ｂｒｏｍｏ４ｃｈｌｏｒｏ３ｉｎｄｏｙｌ）：５溴４氯３吲哚磷酸甲苯胺盐ＤＭＦ（ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）：二甲基甲酰胺４概述ＷＳＤ是由ＷＳＶ引起的一种对虾传染性疾病，是全世界养殖对虾中危害最为严重的对虾病毒病，已被列入世界动物卫生组织（ＯＩＥ）水生动物疫病

6、名录，同时被我国列入一类动物疫病名录。病毒粒子从杆状到椭圆状，带有三层囊膜，粒子较大（８０ｎｍ～１２０ｎｍ×２５０ｎｍ～３８０ｎｍ）。基因组大小为２９０ｋｂ。感染细胞肥大的核内能产生ＷＳＶ特征性的包涵体。５试剂材料及仪器设备本标准所用试剂如无特殊说明均为分析纯试剂。试验用水符合ＧＢ／Ｔ６６８２一级水的要求。５．１犜犪狇酶：－２０℃保存，避免反复冻融或温度剧烈变化。５．２ｄＮＴＰ：ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ各１０ｍｍｏＬ／Ｌ。５．３引物：两对引物浓度为４０μｍｏＬ／Ｌ，其序列分别为：１４６Ｆ１

7、：５’ＡＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＡＴＣＴＡＧ３’１４６Ｒ１：５’ＴＡＡＴＧＣＧＧＧＴＧＴＡＡＴＧＴＴＣＴＴＡＣＧＡ３’１版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１１５１．２—２０１１１４６Ｆ２：５’ＧＴＡＡＣＴＧＣＣＣＣＴＴＣＣＡＴＣＴＣＣＡ３’１４６Ｒ２：５’ＴＡＣＧＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＣＴＴＧＴ３’５．４乙醇：预冷的无水乙醇于－２０℃保存，不需预冷的无水乙醇于常温保存。５．５ＤＩＧ标记的核酸探针：按照国家发明专利ＺＬ１１１３３６．４和实用新型专利ＺＬ２１５０６８．９（专利权

8、人为中国水产科学研究院黄海水产研究所）所提供的技术制备。５．６ＳＥＭＰｔｒｉｓ研磨液：按照国家发明专利ＺＬ１１１３３６．４和实用新型专利ＺＬ２１５０６８．９（专利权人为中国水产科学研究院黄海水产研究所）所提供的技术制备。５．７其他试剂：碱性磷酸酶标记的ＤＩＧ抗体（０．７５Ｕ／μＬ）、ＮＢＴ、ＢＣＩＰ、ＤＭＦ、二甲苯、中性树胶。５．８ＰＣＲ扩增仪。５．９电泳仪。５．１０凝胶成像仪。５．１１程控石蜡切片机或常规手工切片：可切５μｍ～７μｍ厚的