蛋白酶发酵培养基

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1、碱性蛋白酶发酵菌种为芽孢杆菌(Bacillus)， 37℃，培养48 h，1发酵培养基l：可溶性淀粉1%、蛋白胨0.5%、Na2HPO4*12H2O 0.4% 、KH2PO4 0.03% 、CaCl2 0.1% 、pH中性、121℃灭菌25 min。2发酵培养基Il：玉米粉2% 、豆饼粉3% 、麸皮3% 、Na2HPO4*12H2O 0.4% 、KH2PO4 0.03% 、ZnCl2 0.1% 、pH 8.0、121℃灭菌25 min。发酵培养基(1000mL)：黄豆饼粉50g，玉米粉50g，麸皮25g，KH2PO4 0.3g，Na2HPO4 0.4 g，Na2CO3 lg；

2、 自然pH，在36℃下通风培养，前期通风1：0.15，后期通风1：0.2，搅拌40 h左右。低温碱性蛋白酶：黄海黄杆菌发酵培养基(1) 豆饼粉(水解液，加0.5%NaOH，121℃水解30min，冷却、过滤)4.5%、玉米浆(酶解液.购自华北制药厂)6%、Na2HPO4 0.4%、KH2PO4 0.03%、Na2CO，0.1%、MgSO4 0.02%、CaC12 0，2%、泡敌约0.5‰(视具体情况及时补加)，pH 7，121℃灭菌30 min。(2)豆饼粉(水解液.加0.5 NaOH，121℃水解30 min，冷却、过滤)4.5%、葡萄糖1%、Na2HPO40.4%、KH2

3、PO40.03%、Na2CO3 0.1%、MgSO4 0.02%、CaC12  0.2%、泡敌约0.5‰(视具体情况及时补加)，pH7。 121℃灭菌30min分批发酵动力学试验使用瑞士Bioengineering公司NLF22型自动控制发酵罐进行分批发酵。发酵罐容积20 L .两层六平直叶搅拌，双挡板。采用1.2.3节(1)培养基，装料系数0.65，接种量4%，培养温度18℃ ，以5mol/L NaOH液调节pH7左右，通气量1：1、搅拌速度300～500r/min，控制溶氧在35%～45%之间。补料分批发酵试验使用瑞士 Bioengineeri g公司NLF22型自动控制

4、发酵罐进行补料分批发酵。发酵罐容积2OL，两层六平直叶搅拌，双挡板。采用1.2.3节(2)培养基，装料系数0.4，接种量4%，培养温度18℃，以5mol/L NaOH液调节pH 7左右，通气量1：1、搅拌速度300～500 r/min，控制溶氧在35 ～45 之间。当细胞进入对数生长期后以60%葡萄糖补料，控制底物浓度并及时取样测定糖浓度、细胞浓度及总酶活力。弹性蛋白酶发酵培养基酪蛋白胨3%，葡萄糖4%，玉米提取液0.2%，K2HPO4 0.1%，MgSO4*7H2O 0.01%，pH7.0.发酵菌种为芽孢杆菌，发酵培养24h.对黑曲霉黄色变株A一2580产耐温酸性蛋白酶的发

5、酵条件进行优化，由试验结果得如下结论：(1) 麸皮和豆饼粉分别是该菌发酵产生酸性蛋白酶的良好碳源和氮源.(2)通过正交试验优化培养基，确定其最适产酶培养基为(g/L)：麸皮21.6、豆饼粉 48.4、NH C1 2.0、KH2PO 0.8.(3)培养基起始pH为4～5，接种量30 ml发酵液中2×10  8次方个孢子，发酵温度30℃，时间72 h，酸性蛋白酶的产量达到最高，平均酶活达6700 u/m1.中性蛋白酶：菌种耐热芽孢杆菌XJT9503，从新疆吐鲁番火焰山土壤里分离筛选而得.种子培养基组分(g/dI )：玉米粉2，豆饼粉1，磷酸氢二钠0.4，硫酸镁0.02，氯化钙0.

6、02.发酵培养基组分(g/dI )：玉米粉2，豆饼粉1，葡萄糖0.5，磷酸氢二钠0.4，碳酸钠0.085，硫酸镁0.02，氯化钙0.02.3 000 L发酵罐发酵工艺参数为：将培养8 h的种子罐种子，以5%接种量移种于3 000 L发酵罐，46℃ 、180 r/min、4 L/(L·min)通气量下发酵培养18 h左右，测定发酵酶活达10 000 u/mI 以上，还原糖含量低于0.5%，镜检有大量芽孢产生时即可终止发酵，为保证后处理过程中酶活不会大量损失，需迅速降温.普通中温淀粉酶菌种a一淀粉酶枯草芽孢杆菌BF-7658变异株具有较高的产活力，其最适pH为7.5，最适碳氮比为

7、1.4：1。a-淀粉酶发酵培养基：玉米粉7%，豆饼粉5%，磷酸氢二钠0.8%，硫酸铵0.4%，氯化钠0.15%，灭菌前pH7.0一7.5，灭菌后pH6.5—7.0。37.4±1℃下培养44～48小时。（1）初筛培养基：干酪素2.0%（用2.0%NaOH溶液加热溶解），琼脂1.5%，pH7.0；（2）斜面培养基：牛肉膏0.4%，蛋白胨0.6%，酵母浸出粉0.2%，NaCl0.5%，琼脂2.0%，pH7.0；（3）发酵培养基Ⅰ：麸皮4.0%，蛋白胨0.1%，Na2HPO4·12H2O0.4%，KH2PO40