细胞生物学实验测试题

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1、细胞生物学实验测试题（有答案处答案仅供参考，咱们都好好准备吧！）1.如何使用光镜发挥最好的功能效果?(进行操作）放大系统与照明系统的光轴要重合【P7-10 显微镜的使用】2.相差显微镜与普通光镜相比有哪些特殊结构?(进行操作）【P18-20 二。装置---三。操作】3.试述荧光显微镜的原理与用途（并操作）。【P21】4.暗场显微镜光挡如何制作？（并制作）【P12-13 暗视场光挡的制作方法】5.试述酸性磷酸酶显示法的原理及主要步骤。【P61 即实验18细胞中酸性磷酸酶的定位】6.试述DNA的Feulgen染色法的原理及主要步骤.其具体反应原理是，标本经稀盐酸水解后，DNA分子

2、中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子,因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。也就是说,DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。 2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3 DNA是主要的遗传物质，集中于染色体上。1924年孚尔根首先用席夫试剂(Schiff)作试验，鉴定了染色体上DNA的存在，故称为孚尔根染色法。孚尔根染色法的反应原理主要与席夫试剂的化学性质有关，此试剂的基本成分是碱性品红，偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸.碱

3、性品红的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。 碱性品红原为桃红色，当与亚硫酸作用时被氧化，使醌型变为苯型，由桃红色变为无色透明的N-亚磺酸亚硫酸副品红碱，当它与醛基作用时，其分子式又恢复为醌型结构，呈现紫红色 利用1NHCl、60℃下水解时，可将DNA分子中嘌呤碱基与去氧核糖之间的糖苷键打断，使嘌呤脱下，并使去氧核糖C-1位置释放醛基与席夫试剂反应显紫红色。细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应，因此利用孚尔根反应，可以鉴定DNA的存在。7.固定液的主要作用是什么？说出我们实验中所用过的几种不同的固定液及它们的适用范围。固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结

4、构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混合的固定液。固定液杀死细胞，固定细胞形态。卡诺氏固定液【即Carnoy固定液】适用于一般植物组织和细胞的固定，常用于根尖，花药压片及子房石蜡切片等。动物骨髓细胞染色体标本的植被和观察实验中用的也是卡诺氏固定液。F.A.A固定液又称标准固定液,万能固定液.适用于一般根,茎,叶,花药,子房组织切片.在植物形态解剖研究上应用极广,此固定液最大优点是兼有保存剂作用,但对染色体的观察效果较差. 配方:福尔马林(38%甲醛)5ml:冰醋酸5ml:70%酒精90ml 幼嫩材料用

5、50%酒精代替70%酒精,可防止材料收缩;还可加入5ml甘油(丙三醇)以防蒸发和材料变硬.8.常用的组织破碎方法有哪些?各自的适用范围如何？机械法：主要通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方法，常用的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等。1.组织捣碎机 将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等，转速可高达10000rpm/M以上。由于旋转刀片的机械切力很大,制备一些较大分子如核酸则很少使用。2.匀浆器 先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即

6、可将细胞研碎。匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离。制作匀浆器的材料，除玻璃外，还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。 存在的问题；较易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性首以及有些亚细胞器，质地坚硬，易损伤匀浆阀，也不适合用该法处理。3.研钵 多用于细菌或其他坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果。4.细菌磨  是一种改良了的研磨器，比研钵具有更大的研磨面积，而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨粉调成糊状，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可将细

7、菌细胞完全磨碎。物理法：主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法。在生化制备中常用的方法有：1.反复冻溶法 原理：因突然冷冻，细胞内冰晶的形成及 胞内外溶剂浓度的突然改变而破坏细胞。 方法：将待破碎的细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。 特点：此法适用于组织细胞，多用于动物性材料，对微生物细胞作用较差。2.急热骤冷法 将材料投入沸水中，维持85-90分钟，至水浴中急速冷却，此法可用于细菌及病毒材料。3.超声波处理  用一定功率的