细菌和霉菌总数的检验

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1、1　范围本标准规定了化妆品微生物学细菌和霉菌总数的检验。本标准适用于化妆品细菌和霉菌总数的检测。2　规范性引用文件GB7916化妆品卫生标准GB/T7918化妆品微生物标准检验方法QB/T1684-1993化妆品检验规则3　一般规定细菌总数是指1g或1ml化妆品中所含的活菌数量。测定细菌总数和霉菌总数可用来判明化妆品被微生物污染的程度，以及生产所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。3.1 方法提要：本标准采用标准平板计数法。化妆品中污染的微生物种类不同，每种微生物都有它一定的生理物理特性，培养时对营养要求、培养温度、培养时间

2、、pH值、需氧性质等均有所不同。在实际工作中，不可能做到满足所有菌种的要求，因此所测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下（在卵磷脂、吐温-80营养琼脂上，于37℃培养48h；在虎红琼脂培养基上培养72h)生长的一群嗜中温的需氧及兼性厌氧的微生物总数。3.2 仪器3.2.1 250ml锥形瓶。3.2.2 电子天平、量筒。3.2.3 压力蒸汽灭菌锅。3.2.4 移液管。3.2.5 灭菌培养皿：直径9cm。3.2.6 酒精灯。3.2.7恒温培养箱。3.2.8 放大镜。3.3 培养基和试剂的制备3.3.1 生理盐水：氯化钠                      8.5g蒸馏

3、水                      1000ml溶解后，分装到加适量玻璃珠的250ml锥形瓶内，每瓶90ml，经121℃(0.11 MPa)20min高温高压灭菌。3.3.2 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基：制法：称取51g粉状卵磷脂、吐温80-营养琼脂成品培养基加入到1000ml纯水中混合,溶解均匀后分装,经121℃(0.11 MPa)20min高温高压灭菌，储存于冷暗处备用。3.3.3虎红琼脂培养基：制法：称取31.6g粉状虎红琼脂成品培养基加入到1000ml纯水中混合,溶解均匀后分装,经121℃(0.11 MPa)20min高温高压灭菌，储存于冷暗处备用

4、。4倒培养皿操作步骤：4.1按国家标准要求检测细菌总数和霉菌总数.倒培养皿前供检样品的采集、保存和样品制备按《微生物检验总则》要求进行操作。4.1.1细菌总数检测：用移液管吸取1：10稀释的检样1ml，注入到一个灭菌培养皿内；将熔化并冷至45～50℃的卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基倾注于培养皿内，每皿约15ml；随即水平转动培养皿，使样品与培养基充分混合均匀，待培养基凝固后，翻转培养皿，置37℃培养箱内培养48h。4.1.2霉菌总数检测：用移液管吸取1:10稀释的检样1ml，注入到一个灭菌培养皿内；将熔化并冷至45～50℃的虎红琼脂培养基倾注于培养皿内，每皿约15ml；

5、随即水平转动培养皿，使样品与培养基充分混合均匀，待培养基凝固后，翻转培养皿，置25℃培养箱内培养72h。5菌落计数方法：先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各培养皿的菌落数后，求出同一稀释度各培养皿生长的平均菌落数；若培养皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该培养皿不宜计数；若片状菌落不到培养皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个培养皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。6 菌落计数原则及报告方法：6.1 首先选取平均菌落数在30～300之间的培养皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此

6、范围时，即以该培养皿菌落数乘其稀释倍数（见表中例１）6.2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300个之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于或等于2应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数(见表中例2例3)。6.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。6.4 若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。6.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近3

7、0或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例6)。6.6 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。6.7 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示(见下表报告方式栏)。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。细菌计数结果及报告方法：例次不同稀释度的平均菌落数10-1 10-2 10-3两稀释度菌数之比菌落总数个/g或个/ml报告方式个/g或个/ml11365