小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ecp)酶联免疫分析

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1、小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E11799m检测范围：78pg/ml-5000pg/ml最低检测限：19.5pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠ECP，且与其他相关蛋白无交叉反应。有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中ECP含量。说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。4．刚开

2、启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。概述嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)是一种单链糖蛋白是嗜酸性粒细胞(eosinophil，EOS)活化后脱颗粒释放的一种炎症介质，在过敏性炎症过程中，EOS分泌ECP能够诱导肥大细胞释放组胺，介导上皮损伤和角质细胞损伤。ECP是EOS检出的敏感标记，它在嗜酸性炎症(如哮喘、变应性疾病等)中扮演了重要角色。ECP相对分子质量为21000，存在于EOS颗粒的基质部分，占颗粒的30%，等电点为10.8。ECP基因定位于14号染色体上。ECP具有多种生物活性，主要为两大方面，即细胞毒性和非细

3、胞毒性效应。其强大的细胞毒性效应可杀灭寄生虫、杀死肿瘤细胞、神经毒性和损伤心血管、呼吸道，还有抗细菌和抗病毒活性。实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗ECP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗ECP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ECP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assayplate)：一块（96孔）。2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品

4、)。3.样品稀释液(SampleDiluent)：1×20ml/瓶。4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。9.浓洗涤液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25

5、倍。10.终止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6.蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保

6、存，但应避免反复冻融。3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为5000pg

7、/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释5000pg/ml，2500pg/ml，1250pg/ml，625pg/ml，312pg/ml，156pg/ml，78pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制2500pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）5000pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1

8、0μl生物素标记抗体加9