血红蛋白的提取和分离学案

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1、血红蛋白的提取和分离学案[课题目标]1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理[课题重点]凝胶色谱法的原理和方法[课题难点]1、样品的预处理2、色谱柱填料的处理和色谱柱的装填[基础知识]1．凝胶色谱法凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得

2、以分离。2．缓冲溶液缓冲溶液的作用是。缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，例如：血浆的pH是，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH与体内的基本一致。3．电泳电泳是指。许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。电泳利用了待分离样品中各分子以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。两种常用的电泳方法是和，在测定蛋白质分子量时通常使用。蛋白质在聚丙烯酰胺凝

3、胶中的迁移率取决于以及等因素。4．蛋白质的提取和分离蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。5．样品处理血液由和组成，其中红细胞最多。红细胞具有的特点。红细胞中有一种非常重要的蛋白质，其作用是5，血红蛋白有个肽链组成，包括，其中每条肽链环绕一个，磁基团可携带。血红蛋白因含有呈现红色。红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时采用分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入，缓慢搅拌，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。血红蛋白的释放在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合溶

4、液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。透析取1mL的血红蛋白溶液装入中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的中，透析12h。透析可以去除样品中的杂质，或用于更换样品的。6．凝胶色谱操作第一步要制作，第二步要，因为，所以装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。在装填凝胶柱时，不得有存在。因为气泡会，降低分离效果。第三步是。7.凝胶电泳超作判

5、断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行。在鉴定的方法中，使用最多的是。其中电泳过程中，SDS的作用。[能力提升]1.凝胶色谱法分离蛋白质的依据是（）A.对其他分子的亲和力B.溶解度C.所带电荷多少D.相对分子质量的大小2.凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是（）A.糖类化合物B.脂质C.蛋白质D.核酸3.选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处（）A.血红蛋白是有色蛋白B.红细胞无细胞核C.红细胞蛋白质含量高D.红细胞DNA含量高4.将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是（）A.甲苯B.血红蛋白水溶液C.脂溶性物质的沉淀层D.其他杂质的沉淀5.血

6、红蛋白因含有（）而呈红色A.O2B.COC.CO2D.血红素6.下列操作正确的是（）A.分离红细胞时采用低速长时间离心5B.红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C.分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D.透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h7.样品的加入和洗脱的叙述正确的是（）A.先加入1ml透析后的样品B.加样前要使缓冲液缓慢下降全部流出C.如果红色带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功D.洗脱时可以用缓冲液也可以用清水8.下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是（）A.样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液B.通过透析可以去除样品中

7、分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取C.可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化D.可通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度9.凝胶色谱法操作正确的是（）A.将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴B.将橡皮塞下部切出凹穴C.插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D.将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片10.样品的加入和洗脱的操作不正确的是（）A.加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B.加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内C.等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口D.用吸管小心的将1ml透析后

8、的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面