bd-cba 操作说明书

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1、试剂提供：磁珠试剂1、Humaninflammatorycytokinescapturebeads(A1-A6):0.8ml/管，6管抗体包被的磁珠时间长了会有沉淀，用前斡旋3-5秒2、CytometerSetupBeads(D):1.5ml校正起始仪器PMT电压和补偿参数设置。每次使用50ul.抗体及标准试剂1、HumanInflammatoryCytokinesPEDetectionReagent(B):4mlPE包被的人6种炎症因子抗体，每次试验用50ul.2、HumanInflammatoryCytokinesStandards(C)：2个瓶

2、，0.2ml的冻干粉/瓶两个瓶，包含了冻干的人重组蛋白，每个瓶用2mlAssayDiluent稀释准备母液标准品。重悬之后，在2-8℃稳定，12小时内使用。3、PEPositiveControlDetector（E1）：1瓶，0.5ml每次使用50ul,用于CytometerSetupBeads来设置最初仪器补偿参数。4、FITCPositiveControlDetector（E1）：1瓶，0.5ml每次使用50ul,用于CytometerSetupBeads来设置最初仪器补偿参数。缓冲液Buffer试剂1、WashBuffer(F)：260ml,P

3、BS(1×)用于洗涤及重悬洗涤过的磁珠2、AssayDiluent(G):30ml/瓶用于重组和稀释人炎症因子标准品以及稀释测试样本3、SerumEnhancementBuffer(H):10ml当检测血清或血浆标本时，用于稀释混合后的捕获磁珠（CaptureBeads）准备人炎症因子标准品：1、打开一瓶冻干粉的炎症因子标准品，转移标准品白色微球到一个15ml的聚丙烯管中，标记上“母液”。2、加入2mlAssayDiluent(G)溶解重建。在梯度稀释之前，先使得溶解的母液保持均衡15分钟。只能用枪微混匀，不能vortex及剧烈吸取。3、标记用于梯度

4、稀释的流式管，标记后每管加入300ul的AssayDiluent(G)5000，2500，1250，625，312.5，156，80，40，20，104、梯度稀释：从母液中吸取300ul的稀释液加入标记5000的稀释管中，打掉枪头，混匀组分，然后从中再吸取300ul加入标有2500的管中，打掉枪头，再次混匀，再从中吸取300加入1250标记管，打掉枪头，混匀，加入下一管。依次进行。准备人炎症因子捕获磁珠（样本为血清/血浆）：1、计算试验管的数目：包括标准品和对照例：8个血清样本，9个标准稀释液，1个阴性对照（可以不要），共17个管。考虑每次可能产生气

5、泡等损失，因此，多算一个管，即18个标准品管数+血清标本数+1=总管数2、剧烈vortex每一个捕获磁珠悬液管（A1-A8）数秒。3、混合磁珠悬液：每个试验加入10ul磁珠悬液，如18次试验，则加入A1-A8各180ul,加入到一个新的流式管中，标记“mixedcapturedbeads”4、Vortex加入的8种悬液。5、离心200g,5分钟6、小心吸取上清，丢弃（计算上清的量）7、用等量的SerumEnhancementBuffer重悬混匀磁珠，完全vortex.8、室温、避光孵育30分钟混匀的捕获磁珠现在准备转移到试验管中（每个试验管中加入50

6、ul的混匀磁珠）准备试验血清标本稀释样本，1:2或1:10或1:100（本实验不需要）血清/血浆实验流程：1、准备与前述总管数相同数目的干净流式管（如18个），做好标记（标准品或者血清样本）。每管分别加入50ul混匀捕获磁珠。加之前，vortex混匀磁珠。可用悬滴法。2、加入50ul人炎症因子标准品稀释液到对应的标记标准品的流式试验管中。3、加入50ul待测血清标本到标记的流式试验管中。4、室温、避光孵育1.5小时5、加入1mlWashBuffer入每个实验管中，200g，离心5分钟6、倒掉上清，每管留下大约100ul液体。7、加入50ulHuman

7、InflammatoryCytokinesPEDetectionReagent(B)到每个实验管中。轻轻地搅匀，重悬磁珠悬液。8、室温、避光孵育1.5小时。（在这个等待过程中，开始流式参数设置）。1.5小时后开始下面操作9、加入1mlWashBuffer入每个试验管中，200g,离心5分钟10、倒掉上清。11、加入300ulWashBuffer到每一个管中，重悬磁珠。12、流式分析之前，混匀每个样本3-5秒。准备参数设置磁珠1、加入50ulCytometerSetupBeads(D)到3个标记A/B/C的管中。2、加入50ulFITC阳性对照到管B中

8、。3、加入50ulPE阳性对照到管C中。4、孵育ABC各管室温，避光30分钟5、加入450ulWashBuf