环境微生物实验指导书2010.5.25(修改)

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1、环境微生物学实验指导龙建友崔明超夏建荣编广州大学环境科学与工程学院二零壹零年四月-35-实验室守则为了维持环境工程微生物实验室的工作秩序，保证环境工程微生物学实验的教学质量，特制定本守则。1.进入环境生物学实验室的学生必须严格遵守实验室的各项规章制度。2.认真预习《环境微生物学实验指导》，明确每次实验的目的、要求、原理和方法，做到心中有数。3.仔细观摩实验指导老师的讲解和示范，了解仪器设备的基本技能，掌握实验操作的基本要领，严格按照规程操作。4.珍惜每次实验机会，重视各项试验技能，认真观察实验现象，如实做好实验记录。5.需集中处理的物

2、品，应注明组别、名称及处理方法，放在教师指定的地方。6.实验结束后，做好仪器设备、试剂药品等整理工作，经教师验收后，将仪器设备放回原处。值日学生做好实验室的清洁卫生工作。7.提倡科学严谨的实验作风。仔细整理实验结果，认真完成实验报告，并将报告按时交给指导老师披阅。8.爱护国家财产。如因违规操作而损坏仪器设备，须按学校有关规定赔偿。9.保持实验室安静，维护实验室整洁。-35-目录实验一光学显微镜的使用实验二培养基的制备与灭菌实验三空气微生物的检测实验四水中细菌总数的测定实验五土壤微生物的计数法实验六微生物的染色实验七水中总大肠菌群的测定

3、实验八环境样品蛋白质含量的测定实验九重金属污染物对光合作用强度影响的测定实验十叶绿素a的测定实验十一聚合酶链反应-35-实验1通光学显微镜的使用普通光学显微镜简称光学显微镜（lightmicroscope），以平均波长为550nm的可见光作为光源，能分辨的两点距离为0.22。多数细菌的个体大于0.25µm，因此可在光学显微镜下观察。由于许多细菌的大小与光学显微镜的分辨率处于同一个数量级，为了看清细菌的形态与结构，经常使用油镜来提高显微镜的分辨率。在光学显微镜的使用中，油镜的使用是一项十分重要的操作技术。一、目的要求1．了解普通光学显微

4、镜的基本构造和工作原理。2．学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。3．在油镜下观察细菌的几种基本形态。4．采用悬滴法在高倍镜下观察细菌运动。二、基本原理（一）普通光学显微镜的构造普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。1．机械系统机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。（1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。（2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜

5、转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3~5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；装有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移动。有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。-3

6、5-（6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。粗调旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。2．光学系统光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。（1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。目镜一般由两块透镜组成。上面一块称接目透镜，下面一块称场镜。在两块透镜之间或在场镜下方有一光阑。由于光阑的大小决定着视野的大小，故又称它为视野光阑。标本成像于光阑限定的范围之央光阑上粘上一小段细发可用作指针，指示视野标本的位置。在进行显微测量时，目镜测

7、微尺被安装在视野光阑上。目镜上刻有5×、10×、15×、20×等放大倍数。可按需选用。（2）物镜：它的功能是民标本放大，产生物像。物镜可分为低倍镜（4×或10×）、中倍镜（20×）、高倍镜（40×~60×）和油镜（100×）。一般油镜上刻有“OI”（oilimmersion）或HI（homogeneousimmersion）字样，有的刻有一圈红线或黑线，以示区别。物镜上通常标有放大倍数、数值孔径（numericalaperture，简称NA）、工作距离（物镜下端至盖玻片间的距离，mm）及盖玻片厚度等参数。以油镜为例，100/1.25表

8、示放大倍数为100倍，NA为1.25；160/0.17表示镜筒长度160mm，盖玻片厚度等于或小于0.17mm。（3）聚光器：聚光器又称聚光镜，它的功能是把平行的光线聚焦于标本上，增强照明度。聚光器安装在镜台下，可上下移